[發明專利]龍躉精子超低溫冷凍保存應用方法無效
| 申請號： | 201210208301.4 | 申請日： | 2012-06-18 |
| 公開（公告）號： | CN102726369A | 公開（公告）日： | 2012-10-17 |
| 發明（設計）人： | 田永勝;翟介明;梁友;楊傳軍 | 申請（專利權）人： | 中國水產科學研究院黃海水產研究所 |
| 主分類號： | A01N1/02 | 分類號： | A01N1/02;A01K61/00 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 266071 山*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 精子 超低溫 冷凍 保存 應用 方法 | ||
1.一種龍躉精子超低溫冷凍保存應用方法，包括：精子采集、精子活力檢測、冷凍保存液配制、精液稀釋、精子超低溫冷凍保存、精子解凍和檢測、冷凍精子受精，其特征在于精子冷凍保存液配制：在蒸餾水中加入60g/L葡萄糖、10g/LNaCl、0.5g/L?NaHCO3、10％胎牛血清和10％二甲基亞砜配制而成。
2.根據權利要求1所述的龍躉精子超低溫冷凍保存應用方法，其特征在于精子采集時利用50ppm丁香酚麻醉龍躉，人工擠壓腹部采集精液，防止尿液和海水混入。
3.根據權利要求1所述的龍躉精子超低溫冷凍保存應用方法，其特征在于精子活力檢測時龍躉精子活力在90％以上的精液可用于冷凍保存。
4.根據權利要求1所述的龍躉精子超低溫冷凍保存應用方法，其特征在于所述的精液稀釋為冷凍保存液與精液以1∶1的比例稀釋混合，放置在有冰塊的保溫盒平衡5min。
5.根據權利要求1所述的龍躉精子超低溫冷凍保存應用方法，其特征在于所述的精子超低溫冷凍保存為將稀釋精液1ml注入2ml冷凍管中，將冷凍管置于-60--80℃的液氮蒸氣中平衡10min，直接將冷凍管投入液氮中冷凍保存。
6.根據權利要求1所述龍躉精子超低溫冷凍保存應用方法，其特征在于所述的精子解凍和檢測為將精子冷凍管放入37℃水浴中解凍，鏡檢后冷凍精子活力平均達83.67％。
7.根據權利要求1所述龍躉精子超低溫冷凍保存應用方法，其特征在于所述的冷凍精子受精為將解凍精子加入未受精卵中混合均勻，精卵比例為1∶200ml，靜置5min后加入2倍于卵的海水受精。
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