[發明專利]一種鋯基親水色譜柱的制備方法及其在測定原料乳及乳制品中三聚氰胺含量中的應用

無效

• 申請號: 201210208230.8
• 申請日: 2012-06-21
• 公開（公告）號: CN102914599A
• 公開（公告）日: 2013-02-06
• 發明（設計）人: 敦惠娟;魏雨;薛樹科;宋秀芹;譚金標
• 申請（專利權）人: 河北師范大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/60;B01J20/283
• 代理公司: 石家莊新世紀專利商標事務所有限公司 13100
• 代理人: 董金國

技術領域

本發明涉及一種鋯基親水作用色譜柱的制備方法及其在測定原料乳及乳制品中三聚氰胺含量中的應用，屬于色譜檢測技術領域。

背景技術

色譜柱是色譜的“心臟”。理想的色譜柱應該具有良好的化學穩定性、滲透性；另外，色譜柱的柱壽命要長，這樣就能充分保障色譜數據的重復性；最重要的是，色譜柱對待測組分要有適當的保留作用，容量因子k’在2～10范圍內為宜。

三聚氰胺是一種化工原料，因分子中含氮量高，稱為“蛋白精”。乳制品中如果含有三聚氰胺，可能會導致嬰幼兒尿結石、腎衰竭等嚴重疾病，甚至死亡。2008年中國爆發三聚氰胺毒奶粉事件后，國家質量監督檢驗檢疫總局和國家標準化管理委員會頒布了《原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測方法》(GB/T22388-2008)。該標準包括三個方法：高效液相色譜法(HPLC)、液相色譜-質譜/質譜法(LC-MS/MS)和氣相色譜-質譜聯用法(GC-MS和GC-MS/MS)。

三聚氰胺極性強，易解離成離子，所以在傳統色譜柱C8柱和C18柱上不被保留。GB/T22388-2008HPLC法中采用離子對色譜法解決這一問題，但是離子對試劑的加入不但增加檢測費用，而且會造成基線漂移，影響檢測結果的靈敏度和準確性。更重要的是這種分離模式需要的樣品預處理操作非常煩瑣，周期冗長，檢測效率低，有機試劑用量大，有些步驟還會導致假陽性結果出現。因此研究開發簡便、快速、靈敏、準確、適用于HPLC檢測食品中三聚氰胺的方法，對維護食品安全，保護人民的身體健康和消費者的合法權益，促進食品行業的快速健康發展具有重要意義。

色譜實踐表明：親水作用色譜(Hydrophilic?interaction?liquid?chromatography，HILIC)能有效保留反相色譜中保留弱或不保留的強極性物質。本發明采用鋯基親水作用色譜法測定原料乳及乳制品中三聚氰胺的含量。

發明內容

本發明目的是提供一種性能良好的鋯基親水作用色譜柱。

本發明目的之二是提供一種鋯基親水作用色譜柱的應用，也就是提供一種簡便、快速、準確測定乳制品中三聚氰胺的HPLC方法。

具體的，本發明所說的鋯基親水作用色譜柱的制備方法，包括以下步驟：

(1)將顆粒分布均勻、直徑3～5μm的硅膠微米球顆粒置于6mol/L的鹽酸溶液中超聲0.5～2h，進行活化預處理，過濾，用蒸餾水充分洗滌至無氯離子存在，干燥；

(2)將步驟(1)處理過的硅膠微米球放入濃度為0.001～0.12mol/L十二烷基硫酸鈉(SDS)溶液中，磁力攪拌或超聲0.5～3h，過濾、洗滌、干燥，得到在硅球表面被膜一層表面活性劑的復合物(SiO₂-SDS)；

(3)將步驟(2)得到的復合物(SiO₂-SDS)置入鋯溶液或鋯溶膠中，磁力攪拌或超聲0.5～3h，靜置、過濾、洗滌、干燥，得到組裝一層納米氧化鋯的復合物(SiO₂-SDS-ZrO₂)；

(4)將上述復合物(SiO₂-SDS-ZrO₂)重復步驟(2)、(3)操作4-8次，得到組裝多層納米氧化鋯的復合物微米球；

(5)將步驟(4)得到的在硅球表面組裝了多層氧化鋯的復合物微米球在500～600℃灼燒，得到表面多層納米氧化鋯包覆微米硅球，經進一步浮選得到顆粒均勻的核殼型鋯基親水作用色譜填料，即為Zr/Si?HILIC。

(6)將步驟(5)制備的Zr/Si?HILIC微球，以四氯化碳為勻漿液、甲醇為頂替液，勻漿法裝入色譜柱中，色譜柱標記為：HBSD-Zr/Si?HILIC柱。

本發明提供的一種鋯基親水作用色譜柱的應用，具體就是在測定原料乳及乳制品中三聚氰胺含量中的應用，通過以下步驟來實現：

(1)樣品預處理

液態奶、奶粉、酸奶、冰淇淋和奶糖等其中一種，取1g(精確至0.0001g試樣置于50mL具有塞子的塑料離心管中，向離心管加8mL質量濃度為1％的三氯乙酸溶液和2mL乙腈，超聲提取10min，振蕩提取10min，以大于4500r/min的轉速離心10min，取1mL上清液用0.2μm濾膜過濾，待HPLC測定；或者取：