[發(fā)明專利]基于納米金和硫堇信號(hào)放大檢測谷胱甘肽的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210208146.6
• 申請(qǐng)日: 2012-06-14
• 公開（公告）號(hào): CN102914570A
• 公開（公告）日: 2013-02-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 混旭;孫偉;朱歡歡
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 青島科技大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N27/26
• 分類號(hào): G01N27/26;G01N27/30
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

[0001]本發(fā)明屬于電化學(xué)檢測技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種修飾電極的制備和一種信號(hào)放大技術(shù)的研制，在其應(yīng)用上涉及谷胱甘肽含量的檢測。

背景技術(shù)

[0002]谷胱甘肽是細(xì)胞內(nèi)存在最豐富的小分子硫醇類化合物。還原型谷胱甘肽(GSH)(下稱谷胱甘肽)是細(xì)胞內(nèi)非蛋白硫氫基團(tuán)的主要組成部分，在活組織中具有多種重要的生理功能。它不僅有著很重要的生理作用，其在細(xì)胞中含量的變化還是某些疾病和癌癥的直接反映。

[0003]電化學(xué)方法具有操作簡單、靈敏度高、儀器設(shè)備簡單等優(yōu)點(diǎn)。

[0004]離子液體碳糊電極是一種把離子液體代替液體石蠟作為粘合劑而制成的碳糊電極，由于離子液體具有高的電子導(dǎo)電性、好的粘性、寬的電化學(xué)窗口，因此離子液體碳糊電極常作為電化學(xué)傳感器的基底電極，它具有比傳統(tǒng)的玻碳電極更好性能。

[0005]石墨烯具有熱導(dǎo)系數(shù)高、機(jī)械強(qiáng)度好、載荷子流動(dòng)性好、比表面積大等優(yōu)點(diǎn)。

[0006]電化學(xué)沉積納米金具有大的比表面積，提高電子傳遞能力的作用。

發(fā)明內(nèi)容

[0007]本發(fā)明的目的是利用硫堇在金納米粒子表面的吸附作用構(gòu)建信號(hào)放大技術(shù)，以谷胱甘肽切割二硫鍵作用實(shí)現(xiàn)電化學(xué)方法高靈敏度測定谷胱甘肽。

[0008]本發(fā)明所提供的方法包括以下步驟：

[0009](1)以離子液體為修飾劑制備離子液體碳糊電極。

[0010]所述的方法，其所述的離子液體可為陽離子為季銨鹽離子、季鏻鹽離子、咪唑鹽離子和吡咯鹽離子；陰離子為鹵素離子、四氟硼酸根離子、六氟磷酸根離子組成的離子液體，如1-己基吡啶六氟磷酸鹽等。

[0011](2)在氧化石墨烯溶液中利用恒電位沉積法在離子液體碳糊表面制得石墨修飾膜，然后以HAuCl₄為原料，使用恒電位法電沉積金，即可得到納米金/石墨烯修飾離子液體碳糊電極，得工作電極。

[0012]所述的方法，其所述的離子液體碳糊電極可為離子液體碳糊電極、金屬電極、非金屬電極或氧化電極。

[0013](3)以L-胱氨酸(Cystine)或含有二硫鍵的物質(zhì)和功能化的DNA1修飾磁性微珠，制備功能化磁性微珠，磁性微珠作為載體負(fù)載含二硫鍵的物質(zhì)和功能化的DNA1。

[0014](4)利用谷胱甘肽切割L-胱氨酸二硫鍵作用，將(3)中制備的功能化磁性微珠表面的DNA1切割下來，釋放DNA1；隨后對(duì)釋放出的DNA1進(jìn)行測定，據(jù)此實(shí)現(xiàn)對(duì)谷胱甘肽的測定。

[0015](5)利用(4)中釋放出來的DNA1對(duì)納米金/石墨烯修飾離子液體碳糊電極進(jìn)行修飾，在電極表面形成捕獲DNA，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)中去捕獲電化學(xué)探針。

[0016](6)電化學(xué)探針(EC?probe)的制備。利用硫堇在納米金表面的吸附作用，制備硫堇修飾的金納米粒子，然后將DNA2負(fù)載其上，制備DNA2/硫堇/納米金信號(hào)放大單元，即電化學(xué)探針。

[0017](7)電化學(xué)檢測。將DNA1/納米金/石墨烯修飾離子液體碳糊工作電極浸入電化學(xué)探針溶液中，利用DNA雜交作用，DNA1將DNA2/硫堇/納米金信號(hào)放大單元捕獲在電極表面，引起電極表面電活性物質(zhì)濃度的變化，據(jù)此實(shí)現(xiàn)對(duì)谷胱甘肽的檢測。

[0018]所述的方法，其所述的離子液體碳糊電極可為離子液體碳糊電極、金屬電極、非金屬電極或氧化電極。

[0019]所述的方法，其所述的電活性物質(zhì)為硫堇、聯(lián)吡啶釕、亞甲基蘭以及含正電荷的電活性物質(zhì)。

附圖說明

[0020]圖1為本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)原理示意圖。

[0021]圖2為不同修飾電極在1.0mmol?L^-1[Fe(CN)₆]^3-/4-和0.5mol?L^-1?KCl溶液中的循環(huán)伏安圖。

[0022]圖3為不同濃度目標(biāo)物的差分脈沖伏安法曲線。從a到f谷胱甘肽濃度依次為1.0×10^-12，1.0×10^-11，1.0×10^-10，1.0×10^-9，1.0×10^-8，1.0×10^-7mol?L^-1。插圖：濃度的對(duì)數(shù)對(duì)峰電流的關(guān)系曲線。

具體實(shí)施方式

[0023]下面的實(shí)例將具體說明本發(fā)明的操作方法，但本發(fā)明的實(shí)施方法不限于此。

實(shí)例：

[0024]1本發(fā)明所用的試劑：