[發明專利]一種檢測污泥中四環素類抗性基因tetB的引物序列及方法有效
| 申請號： | 201210207878.3 | 申請日： | 2012-06-20 |
| 公開（公告）號： | CN102719431A | 公開（公告）日： | 2012-10-10 |
| 發明（設計）人： | 陳紅;張明美 | 申請（專利權）人： | 浙江大學 |
| 主分類號： | C12N15/11 | 分類號： | C12N15/11;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224 | 代理人： | 胡紅娟 |
| 地址： | 310027 浙*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 檢測 污泥 四環素 抗性 基因 tetb 引物 序列 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種檢測污泥中四環素類抗性基因tetB的引物序列，其特征在于，包括正向引物和反向引物，其堿基序列為：
正向引物：GGCAGGAAGAATAGCCACTAA；
反向引物：AGCGATCCCACCACCAG。
2.一種利用權利要求1所述的引物序列檢測污泥中四環素類抗性基因tetB的方法，其特征在于，包括：
(1)提取待測污泥樣品中的DNA，以提取的DNA為模板，用權利要求1所述的正向引物和反向引物進行定量PCR擴增并記錄達到熒光閾值時的循環數；
(2)將步驟(1)中得到的循環數參照定量PCR測定目的基因tetB質粒標準品的標準曲線，得到待測污泥樣品中四環素類抗性基因tetB的含量。
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述的定量PCR的反應體積為15ul：2ul?DNA溶液，7.5ul?SYBR?Premix?Ex?Taq溶液，0.3ul?ROX?Reference溶液，0.3ul濃度為10mM的正向引物，0.3ul濃度為10mM的反向引物，4.6ul?ddH2O。
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