[發明專利]鑒定雞性連鎖矮小基因的一種方法及其專用引物

有效

• 申請號: 201210207695.1
• 申請日: 2012-06-18
• 公開（公告）號: CN102747077A
• 公開（公告）日: 2012-10-24
• 發明（設計）人: 鄧學梅;魏霞;葛雅瓊;肖凡;吳常信
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N15/10;C07H21/04;C12Q1/68
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

技術領域

本發明涉及鑒定雞性連鎖矮小基因的一種方法及其專用引物。?

背景技術

自然界中，哺乳動物的性別屬于XY型，而鳥類屬于ZW型。造成雞矮小性狀的原因較多，而雞性連鎖矮小基因（sex-linked?dwarf?gene,簡稱dw基因）是目前已知的雞8種矮小基因中唯一對雞本身健康無害的突變。dw基因是雞性染色體上的生長激素受體（GHR）基因（Dw基因）3’-非翻譯區(3’-UTR)存在1.7kb的缺失突變形成的等位基因。自1935年蘇聯學者BCHTAMKF發現該基因后，很多學者都對該基因的作用機理和遺傳特性進行了探討，并逐步應用于雞的育種實踐。dw基因位于Z染色體上，定位于肝壞死基因ln和無翅基因wl之間，表現為隱性伴性遺傳，對正常基因Dw為隱性，只有矮小型基因純合子的公雞和攜帶矮小基因的母雞才表現為矮小，明顯的外部特征是脛骨縮短20%左右，而Z^DwZ^dw雜合子的公雞表型正常，不能與純合非矮小公雞（Z^DwZ^Dw）從表型上區分。人們希望從分子水平準確區分Z^DwZ^dw與Z^DwZ^Dw基因型，但是，目前檢測dw基因的方法是在缺失片段兩端設計引物，通過檢測矮小和非矮小雞基因組片段的大小來進行判斷，在擴增過程中，由于該基因缺失片段較長，會導致模板對引物的競爭，從而導致在雜合子中只能檢測到缺失后的片段，而非缺失的完整片段難以檢測到，因而對于雜合子與純合非矮小公雞無法進行準確判斷，限制了這一技術在育種工作中的應用。?

發明內容

本發明的目的是提供鑒定或輔助鑒定雞是否含有dw基因和/或Dw基因的成套引物對或引物對及其應用。?

本發明所提供的成套引物對或引物對，具體為下述1）-3）中的任一種：?

1）用于鑒定或輔助鑒定雞是否含有dw基因和/或Dw基因的成套引物對，由檢測雞dw基因的引物對1和檢測雞Dw基因的引物對2組成；所述引物對1由序列表中序列1所示的引物和序列表中序列2所示的引物組成；所述引物對2由序列表中序列3所示的引物和序列表中序列4所示的引物組成；?

2）用于鑒定或輔助鑒定雞是否含有dw基因的引物對，為檢測雞dw基因的引物對1；所述引物對1由序列表中序列1所示的引物和序列表中序列2所示的引物組成；?

3）用于鑒定或輔助鑒定雞是否含有Dw基因的引物對，為檢測雞Dw基因的引物對2；所述引物對2由序列表中序列3所示的引物和序列表中序列4所示的引物組成。?

上述成套引物對或引物對在制備產品中的應用也屬于本發明的保護范圍，具體可?為如下Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ中的任一種：?

Ⅰ、由檢測雞dw基因的引物對1和檢測雞Dw基因的引物對2組成的成套引物對在制備鑒定或輔助鑒定雞是否含有dw基因和/或Dw基因產品中的應用；所述引物對1由序列表中序列1所示的引物和序列表中序列2所示的引物組成；所述引物對2由序列表中序列3所示的引物和序列表中序列4所示的引物組成；?

Ⅱ、檢測雞dw基因的引物對1在制備鑒定或輔助鑒定雞是否含有dw基因產品中的應用；所述引物對1由序列表中序列1所示的引物和序列表中序列2所示的引物組成；?

Ⅲ、檢測雞Dw基因的引物對2在制備鑒定或輔助鑒定雞是否含有Dw基因的產品中的應用；所述引物對2由序列表中序列3所示的引物和序列表中序列4所示的引物組成。?

上述成套引物對或引物對的制備方法也屬于本發明的保護范圍，該方法具體可包括如下1）-3）中的任一步驟：?

1）以dATP，dTTP，dCTP和dGTP為原料制備序列表中序列1、序列2、序列3和序列4所示的4種單鏈DNA，得到所述引物對1和所述引物對2；?

2）以dATP，dTTP，dCTP和dGTP為原料制備序列表中序列1和序列2所示的2種單鏈DNA，得到所述引物對1；?

3）以dATP，dTTP，dCTP和dGTP為原料制備序列表中序列3和序列4所示的2種單鏈DNA，得到所述引物對2。?

含有上述成套引物對或引物對的試劑盒也屬于本發明的保護范圍，該試劑盒具體可為下述1）-3）中的任一種：?