[發(fā)明專利]一種鑒定油葵康地4號(hào)品種純度的方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210205100.9
• 申請(qǐng)日: 2012-06-21
• 公開（公告）號(hào): CN102690893A
• 公開（公告）日: 2012-09-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王沛政;段維;楊勇剛;李新鵬
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 新疆康地種業(yè)科技股份有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體說，本發(fā)明具體涉及一種鑒定油葵康地品種純度方法的技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

向日葵(Helianthus?annuus?L.)是世界四大油料作物之一,也是我國(guó)北方地區(qū)的主要油料作物,其作為油料或蛋白質(zhì)資源日益受到人們的重視。

隨著向日葵育種技術(shù)的不斷發(fā)展和雜交品種的大面積推廣,品種鑒定已成為新品種保護(hù)及保護(hù)農(nóng)民利益的重要手段。傳統(tǒng)的品種鑒定多用形態(tài)學(xué)方法,?是根據(jù)作物的形態(tài)特征和農(nóng)藝生理特征鑒定特定的基因型,它雖是一種最原始的品種純度檢驗(yàn)方法,但簡(jiǎn)單、直觀、易觀測(cè)記載、長(zhǎng)期以來形態(tài)標(biāo)記是鑒定雜交向日葵品種的主要手段。但隨著育種新技術(shù)的不斷發(fā)展,品種間的形態(tài)學(xué)差異越來越小,能用于鑒定的形態(tài)性狀已顯不足,增加了鑒定的困難;而且此法鑒定時(shí)間長(zhǎng),費(fèi)用高。近年來,蛋白質(zhì)和DNA多態(tài)性檢測(cè)技術(shù)迅速發(fā)展,尤其是DNA多態(tài)性檢測(cè)技術(shù)以其檢測(cè)材料少、時(shí)間短、結(jié)果穩(wěn)定性好、重復(fù)性高、技術(shù)簡(jiǎn)單、成本低而逐漸成為目前檢測(cè)的主流方法。

????DNA分子檢測(cè)技術(shù)基于DNA分子的缺失、插入、易位、倒位、重排或由于存在長(zhǎng)短與排列不一的重復(fù)序列機(jī)制而產(chǎn)生的多態(tài)性(polymorphism?diversity?orfingerprints)，從本質(zhì)上能反映生物個(gè)體或種群間基因組中某種差異特征的DNA片段。雜交向日葵品種純度鑒定應(yīng)用的分子檢測(cè)技術(shù)有RFLP技術(shù)、RAPD技術(shù)、SSR技術(shù)、AFLP技術(shù)。RFLP??(Restriction?Fragment?Length?Polymorphism)是由Grodzicker(1974)最早創(chuàng)立的，該技術(shù)是利用限制性內(nèi)切酶酶解不同生物體的DNA分子后，用特異性探針進(jìn)行Sothern分子雜交，通過放射自顯影來揭示DNA的多態(tài)性。由于RFLP標(biāo)記對(duì)DNA的需要量較大(5-10ug)，質(zhì)量要求較高，技術(shù)較為復(fù)雜，程序繁多，周期長(zhǎng)，費(fèi)用較高，多態(tài)有限，對(duì)材料需求量大巨有放射性同位素的潛在污染和危害，因而目前尚不宜于用于品種的純度鑒定。RAPD?(Randomly?Amplified?Polymorphic?DNA)技術(shù)是以基因組DNA為模板，以一個(gè)隨機(jī)的寡核普酸序列為引物，一般為9一l0bp堿基，通過PCR擴(kuò)增反應(yīng)，產(chǎn)生不連續(xù)的DNA產(chǎn)物，再經(jīng)過脂糖凝膠電泳得到多態(tài)性的DNA譜帶。RAPD技術(shù)主要特點(diǎn)是反應(yīng)靈敏，多態(tài)性強(qiáng)，具有簡(jiǎn)便、快速的優(yōu)點(diǎn)，既有大量的隨機(jī)引物可供篩選使用，又不受種屬的限制，因而被廣泛用于多種作物的品種純度鑒定。SSR標(biāo)記在人類及植物的基因組中，均存在著由1一4個(gè)堿基對(duì)組成的簡(jiǎn)單重復(fù)序列(simple?sequence?repeats,簡(jiǎn)稱SSR)，又稱之為微衛(wèi)星(microsatellite)，SSR技術(shù)已廣泛應(yīng)用于玉米、水稻等作物的品種純度鑒定，SSR最大的優(yōu)點(diǎn)在于其擴(kuò)增產(chǎn)物在進(jìn)行測(cè)序膠電泳分離時(shí)具有單堿基的高分辨率，能檢測(cè)到很高的多態(tài)性，遺傳信息量較大，并具有較好的穩(wěn)定性和重演性。AFLP(Amplify?Fragment?length?Poiymorphism)技術(shù)擴(kuò)增片斷長(zhǎng)度多態(tài)性是RFLP和RAPD兩項(xiàng)技術(shù)的結(jié)合，是由荷蘭科學(xué)家Zabean等人發(fā)明的一項(xiàng)專利技術(shù)。AFLP技術(shù)具較好的重復(fù)性，但操作復(fù)雜，步驟多，對(duì)實(shí)驗(yàn)技能和儀器精度要求均很高，難以在作物品種純度鑒定上普及。

康地4號(hào)為新疆康地種業(yè)科技股份有限公司2001年選育的早熟油葵品種。生育期日數(shù)春播95天左右，耐向日葵霜霉病和葉斑病。抗倒伏，耐鹽堿。平均畝產(chǎn)200公斤。綜上所述，從傳統(tǒng)的形態(tài)鑒定、生化指紋檢測(cè)發(fā)展到分子水平和基因水平檢測(cè)雜交向日葵品種純度的檢驗(yàn)技術(shù)經(jīng)歷了從簡(jiǎn)單到復(fù)雜而精確的過程，每一種方法都有其各自的優(yōu)點(diǎn)和不足，因而至今在農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程中尚無快速的生化或DNA分子檢測(cè)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)程序。現(xiàn)有技術(shù)中未見報(bào)道有關(guān)鑒定油葵康地4號(hào)品種純度的方法。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中未見報(bào)道有關(guān)鑒定油葵康地4號(hào)品種純度的方法的技術(shù)現(xiàn)狀，本發(fā)明提供一種鑒定油葵康地4號(hào)品種純度的方法，可有效用于鑒定上述油葵雜交種種子的純度，辨別種子的真?zhèn)危谟涂s交種種子高效準(zhǔn)確的質(zhì)量控制，加快油葵商品種子的質(zhì)量檢測(cè)進(jìn)程，鑒定體系能夠在短時(shí)間內(nèi)對(duì)大量樣品進(jìn)行快速鑒定，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。