[發明專利]一種靶向CD123陽性白血病細胞的溶瘤腺病毒構建方法及其用途

無效

• 申請號: 201210204636.9
• 申請日: 2012-06-20
• 公開（公告）號: CN102747046A
• 公開（公告）日: 2012-10-24
• 發明（設計）人: 李恭楚;李新;陳磊;張艷紅;駱菁菁;武虎;李曉艷;劉新垣
• 申請（專利權）人: 浙江理工大學
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/63;C12N15/66;A61K38/17;A61K48/00;A61P35/02
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 張法高

1.一種靶向CD123陽性白血病細胞的溶瘤腺病毒的構建方法，其特征在于，所述方法構建的溶瘤腺病毒攜帶sCAR-IL3表達框或攜帶sCAR-IL3表達框和外源抗癌基因表達框，具體的構建方法包括如下步驟：

1）構建sCAR-IL3的表達框；

2）酶切回收sCAR-IL3的表達框，插入到pXC2-sp-E1A質粒相應酶切位點,?獲得pXC2-sCAR-IL3-sp-E1A質粒；

3）?pXC2質粒在刪除E1B后在原位置引入酶切位點，插入外源抗癌基因表達框構建得到pXC2-△E1B-gene質粒；通過酶切連接將pXC2-sCAR-IL3-sp-E1A質粒上的sCAR-IL3-sp片段置換到pXC2-△E1B-gene質粒上，構建得到pXC2-sCAR-IL3-sp-E1A-△E1B-gene質粒；

4）pXC2-sCAR-IL3-sp-E1A質粒及pXC2-sCAR-IL3-sp-E1A-△E1B-gene質粒分別和pBHGE3骨架質粒共轉染HEK293細胞，在HEK293細胞內完成溶瘤腺病毒Ad-sCAR-IL3-sp-E1A和溶瘤腺病毒Ad-sCAR-IL3-sp-E1A-△E1B-gene的組裝；

5）分離純化溶瘤腺病毒Ad-sCAR-IL3-sp-E1A和/或溶瘤腺病毒Ad-sCAR-IL3-sp-E1A-△E1B-gene。

2.如權利要求1所述的靶向CD123陽性白血病細胞的溶瘤腺病毒的構建方法，其特征在于，所述的溶瘤腺病毒Ad-sCAR-IL3-sp-E1A和/或溶瘤腺病毒Ad-sCAR-IL3-sp-E1A-△E1B-gene是由腫瘤特異啟動子控制復制的條件復制型腺病毒。

3.如權利要求1所述的靶向CD123陽性白血病細胞的溶瘤腺病毒的構建方法，其特征在于，所述的溶瘤腺病毒Ad-sCAR-IL3-sp-E1A和/或溶瘤腺病毒Ad-sCAR-IL3-sp-E1A-△E1B-gene是通過刪除病毒基因獲得的條件復制型腺病毒。

4.如權利要求1所述的靶向CD123陽性白血病細胞的溶瘤腺病毒的構建方法，其特征在于，所述的外源抗癌基因包括IL-24、TRAIL、MnSOD、smac、p53、PPA中的一種或多種。

5.一種如權利要求1所述方法構建的靶向CD123陽性白血病細胞的溶瘤腺病毒的用途，其特征在于，所述的溶瘤腺病毒Ad-sCAR-IL3-sp-E1A和/或溶瘤腺病毒Ad-sCAR-IL3-sp-E1A-△E1B-gene用于制備抗腫瘤藥物。