[發明專利]一種阿拉瑞林的固液相合成法

有效

• 申請號: 201210204261.6
• 申請日: 2012-06-20
• 公開（公告）號: CN102702327A
• 公開（公告）日: 2012-10-03
• 發明（設計）人: 徐紅巖;竺劍峰;飯島悠介
• 申請（專利權）人: 吉爾生化（上海）有限公司;上海吉爾多肽有限公司;濱海吉爾多肽有限公司
• 主分類號: C07K7/23
• 分類號: C07K7/23;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 上海浦東良風專利代理有限責任公司 31113
• 代理人: 張勁風

1.一種阿拉瑞林的固液相合成法，其特征在于，包括如下步驟：

1）以脯氨酸-2氯-三苯甲基-氯樹脂為起始樹脂采用芴甲氧羰基固相合成法逐一偶聯每一個保護氨基酸，合成得到側鏈全保護的肽鏈樹脂；

2）對側鏈全保護的肽鏈樹脂進行切割，得到全保護的肽鏈片段pGluP-9；

3）對全保護的肽鏈片段pGluP-9進行C端乙胺化，得到阿拉瑞林的全保護片段；

4）對阿拉瑞林的全保護片段切割除去側鏈保護基，得到阿拉瑞林粗品肽。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1）具體內容包括如下步驟：

1）取脯氨酸-2氯-三苯甲基-氯樹脂用二氯甲烷浸泡，使樹脂充分溶脹，抽干，以N,N-二甲基甲酰胺作溶劑，加入芴甲氧羰基（2,2,4,6,7-五甲基-2H-苯并呋喃-5-磺酰基）精氨酸、N-甲基嗎啉或二異丙基乙胺，用O-苯并三唑-N,N,N,N-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽/1-羥基苯并三唑、O-(苯并三唑-1-氧)-N,N,N,N-四甲基脲鎓六氟硼酸鹽/1-羥基苯并三唑、O-(7-偶氮苯并三氮唑-1-氧)-N,N,N,N-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽/1-羥基-7-偶氮苯并三唑中的一種混合物為縮合劑，反應0.5-2小時，茚三酮法檢測反應終點，抽干，用N,N-二甲基甲酰胺洗滌3-5次，抽干，獲得芴甲氧羰基-（2,2,4,6,7-五甲基-2H-苯并呋喃-5-磺酰基）精氨酸-脯氨酸-2氯-三苯甲基-氯樹脂；

2）在步驟（1）獲得的樹脂中，加入脫帽試劑，反應10-30分鐘，抽干，用N,N-二甲基甲酰胺洗滌5-10次，抽干，以N,N-二甲基甲酰胺為溶劑，加入具有芴甲氧羰基保護的氨基酸、N-甲基嗎啉或二異丙基乙胺，以及用O-苯并三唑-N,N,N,N-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽/1-羥基苯并三唑、O-(苯并三唑-1-氧)-N,N,N,N-四甲基脲鎓六氟硼酸鹽/1-羥基苯并三唑、O-(7-偶氮苯并三氮唑-1-氧)-N,N,N,N-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽/1-羥基-7-偶氮苯并三唑中的一種混合物為縮合劑，反應0.5-2小時，檢測反應終點，抽干，用N,N-二甲基甲酰胺洗滌3-5次，抽干，然后再加入脫保護試劑，脫保護反應，再加入具有芴甲氧羰基保護基團的氨基酸，如此反復，直至連完最后一個焦谷氨酸，用N,N-二甲基甲酰胺洗滌3-5次，再用甲醇和二氯甲烷交替洗滌3次，最后加甲醇收縮樹脂，抽干，真空干燥，獲得焦谷氨酸-(三苯甲基)組氨酸-（叔丁氧羰基）色氨酸-（叔丁氧基）絲氨酸-（叔丁氧基）酪氨酸-D-丙氨酸-亮氨酸-（2,2,4,6,7-五甲基-2H-苯并呋喃-5-磺酰基）精氨酸-脯氨酸-2氯-三苯甲基-氯樹脂；所說的具有芴甲氧羰基保護基團的氨基酸，依次包括：芴甲氧羰基亮氨酸，芴甲氧羰基-D-丙氨酸，芴甲氧羰基叔丁氧基酪氨酸，芴甲氧羰基叔丁氧基絲氨酸，芴甲氧羰基叔丁氧羰基色氨酸，芴甲氧羰基三苯甲基組氨酸。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，脯氨酸-2氯-三苯甲基-氯樹脂的取代度在0.3mmol/g-1.2mmol/g之間，芴甲氧羰基（2,2,4,6,7-五甲基-2H-苯并呋喃-5-磺酰基）精氨酸的量為樹脂摩爾量的1-5倍；脫帽試劑為體積比10-30%的哌啶/N,N-二甲基甲酰胺混合溶液，每一步保護氨基酸的量的是樹脂摩爾量的1-5倍，縮合試劑的量是樹脂摩爾量的1-5倍，N-甲基嗎啉或二異丙基乙胺的量是樹脂摩爾量的2-10倍，每一步反應終點的檢測方法所采用的是茚三酮檢測法。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，脯氨酸-2氯-三苯甲基-氯樹脂的取代度為0.6mmol/g，芴甲氧羰基（2,2,4,6,7-五甲基-2H-苯并呋喃-5-磺酰基）精氨酸的量為樹脂摩爾量的2倍；脫帽試劑為體積比20%的哌啶/N,N-二甲基甲酰胺混合溶液，每一步保護氨基酸的量的是樹脂摩爾量的2倍，縮合試劑為O-(苯并三唑-1-氧)-N,N,N,N-四甲基脲鎓六氟硼酸鹽/1-羥基苯并三唑，其用量是樹脂摩爾量的2倍，二異丙基乙胺的量是樹脂摩爾量的4倍。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟2）包括如下步驟：

在側鏈全保護的肽鏈樹脂加入切肽試劑，反應1-3小時，抽濾濾掉樹脂顆粒，收集濾液，減壓蒸餾除去溶劑，加水析出白色固體，抽干，真空干燥，獲得全保護的肽鏈片段pGluP-9。

6.?根據權利要求5所述的方法，其特征在于所用的切肽試劑為體積比為1%-5%的三氟乙酸/二氯甲烷混合溶液。