[發明專利]一種金線蓮指紋圖譜的建立方法及福建金線蓮和臺灣金線蓮指紋圖譜

有效

• 申請號: 201210203783.4
• 申請日: 2012-06-19
• 公開（公告）號: CN102768254A
• 公開（公告）日: 2012-11-07
• 發明（設計）人: 胡珊梅;陳詠梅;吳波
• 申請（專利權）人: 福建省金草生物集團有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 廈門市首創君合專利事務所有限公司 35204
• 代理人: 連耀忠

技術領域

本發明屬于中藥質量控制領域，特別是涉及一種金線蓮指紋圖譜的建立方法及福建金線蓮和臺灣金線蓮指紋圖譜。

背景技術

金線蓮為蘭科開唇蘭屬植物花葉開唇蘭Anoectochilus?roburghii(Wall.)Lindl)、臺灣金線蓮Anoectochilus?formosanus?Hay，多年生珍稀中草藥。它在民間使用范圍較廣，在港臺及東南亞地區素有“藥王”、“金草”、“神藥”和“鳥人參”等美稱。性平、味甘，歸肺、肝、腎、膀胱經。具有清熱涼血、解毒消腫、祛風利濕、鎮驚平肝、補腎、利尿、潤肺止咳等功效。用于治療小兒急驚風高熱、風濕性關節炎、肝炎、腎炎、膀胱炎、乳糜尿、血尿、支氣管炎、咯血、糖尿病、高血壓等；現代用于抗腫瘤等疑難雜癥，提高免疫力、保肝護肝、降血脂、輔助抗動脈硬化及腦血栓、抗病毒、治重癥肌無力、祛除青春痘和雀斑等。

金線蓮主要分布于亞洲的日本、中國、斯里蘭卡、印度和尼泊爾等國，我國南方福建、廣西、廣東、海南、貴州、四川、云南等省都有其豐富的藥材資源，福建與臺灣兩省作為藥用的主要有：福建金線蓮、臺灣金線蓮和高雄金線蓮三種。

金線蓮性狀特征：福建金線蓮本品為干燥全草，略呈皺縮狀，莖節明顯；葉互生具柄，葉基膜質鞘狀抱莖，葉黃綠色，呈卵形或橢圓形，葉面有光澤、葉脈為金黃色羽狀網脈，葉背淡紫紅色；香氣特異。

臺灣金線蓮與福建金線蓮主要不同點為葉墨綠色，葉脈為白色羽狀網脈。

金線蓮的化學成分與含量確切，具有重要藥理活性的物質主要為：黃酮類化合物（槲皮素、異鼠李素)，甾體類化合物（24～異丙烯基膽甾醇、開唇蘭甾醇、麥角甾醇、豆甾醇、菜油甾醇、β～谷甾醇等），三萜類化合物（木栓酮、琥珀酸、香豆酸、阿魏酸、胡蘿卜苷、棕櫚酸、齊墩果酸、熊果酸），多糖類（多糖13.326%，低聚糖11.243%，還原糖9.73%），生物堿（石杉堿甲和烏頭堿），和強心甙類，酯類，牛磺酸等。

在金線蓮藥材的質量評價方面，目前國內外發表的文獻中，一般采用顯微鑒定、薄層色譜鑒定，或單一成分含量測定，如黃酮類、金線蓮苷等，并作為金線蓮藥材的質量評價指標，顯然，這種質量評價方法不能準確鑒別和評價金線蓮藥材質量。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術缺陷，提供一種鑒別金線蓮真偽優劣的指紋圖譜的建立方法。

本發明的另一目的，是提供福建金線蓮的指紋圖譜。

本發明的再一目的，是提供臺灣金線蓮的指紋圖譜。

本發明的技術方案如下：

一種金線蓮指紋圖譜的建立方法，采用高效液相色譜法，具體包括如下步驟：

（1）供試品溶液的制備：精密稱取供試品細粉溶于甲醇中，進行超聲處理后，離心取上清液，將該上清液過濾，即得供試品溶液；

（2）色譜條件：色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；洗脫方式：以磷酸和甲醇組成的梯度洗脫液為流動相，進行梯度洗脫；紫外檢測：檢測波長為310～320nm。

（3）測定：精密吸取供試品溶液，將其注入高效液相色譜儀，依照高效液相色譜法測定，得到指紋圖譜。

在本發明的一個優選實施方案中，所述步驟（1）為：精密稱取供試品細粉0.1～5g置于具塞三角燒瓶中，精密加入甲醇10～100mL，密塞，精密稱定，超聲處理35～55分鐘后，放冷至室溫，用甲醇補足減失的重量，搖勻，離心7～15分鐘后取上清液，將該上清液經濾膜過濾，即得供試品溶液。

在本發明的一個優選實施方案中，所述步驟（1）為：精密稱取供試品細粉0.2g置于具塞三角燒瓶中，精密加入甲醇20mL，密塞，精密稱定，超聲處理45分鐘后，放冷至室溫，用甲醇補足減失的重量，搖勻，離心10分鐘后取上清液，將該上清液經0.25μm濾膜過濾，即得供試品溶液。

在本發明的一個優選實施方案中，所述步驟（2）為：色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；洗脫方式：以0.1～0.6%磷酸和甲醇組成的梯度洗脫液為流動相，進行梯度洗脫；柱溫：25～30℃；紫外檢測：檢測波長為313～318nm；流速：0.8～1.2mL/min。

在本發明的一個優選實施方案中，所述步驟（2）為：色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；洗脫方式：以0.4%磷酸和甲醇組成的梯度洗脫液為流動相，進行梯度洗脫；柱溫：30℃；紫外檢測：檢測波長為316nm；流速：1.0mL/min。

在本發明的一個優選實施方案中，所述步驟（2）中的梯度洗脫的程序按以下體積濃度配置進行：

0分鐘時，流動相為25%的甲醇和75%的0.4%磷酸溶液；