[發明專利]一種用于分離純化凝血因子VIII的介質及其制備方法

有效

• 申請號: 201210202168.1
• 申請日: 2012-06-19
• 公開（公告）號: CN103506080A
• 公開（公告）日: 2014-01-15
• 發明（設計）人: 汪志友
• 申請（專利權）人: 汪志友
• 主分類號: B01J20/24
• 分類號: B01J20/24;B01J20/30;B01D15/08;C07K14/755;C07K1/22
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1.一種用于分離純化凝血因子VIII的介質及其制備方法，其特征在于將親水性凝膠微球作為基質懸浮于活化劑中制成活化基質，然后以偶聯法對活化基質鍵合活化基質鍵合凝血因子VIII特異性親和小肽配體，實現基質與凝血因子VIII特異性親和小肽配位體共價連接。

2.根據權利要求1所述的介質，其特征在于，構成所述介質的基質為親水性凝膠微球，包括親水性瓊脂糖凝膠微球、親水性葡聚糖凝膠微球、親水性聚丙烯酰胺凝膠微球；但優選親水性瓊脂糖凝膠微球作為基質材料；基質的粒徑為50-160微米，交聯度為4-10％范圍。

3.根據權利要求1所述的介質，其特征在于，構成所述介質的基質與配體可以通過-O-(醚鍵)，-NH-，-S-(硫醚鍵)相連接。

4.根據權利要求1所述的介質，其特征在于，構成所述介質的基質與配體之間還可以以包括但不限于下列一種加長的連接臂相連接：

-O-CH2-CH2-CH2-X-，其中X＝O，N，S

-O-CH2-CH(OH)-CH2-X-，其中X＝O，N，S

-O-CH2-CH2-O-CH2-CH2-X，其中X＝O，N，S。

5.根據權利要求1所述的介質，其特征在于，構成所述介質的小肽配位體(包括其化學改性異構體)結構式為：

NH2-(X-EY1C)-COOH

式中：NH2為小肽氨基端的α-氨基、X表示小肽氨基端的氨基酸亞級結構序列(包括：W、EYHSW等)或為3-吲哚乙酸(3-IAA)、E為谷氨酸、Y1為酪氨酸或與其左側谷氨酸所形成肽鍵被還原成CH2的改性酪氨酸、C為半胱氨酸、COOH表示小肽羧基端羧基。按照上式，典型的凝血因子VIII特異性親和作用配位小肽有：

L1＝EYHSWEYC；

L2＝WEYC；

L3＝3-IAA-EYC，Y表示E-Y之間肽鍵上羰基未被還原；

L4＝3-IAA-EY1C，Y1表示E-Y之間肽鍵上羰基被還原成CH2。

6.根據權利要求1所述的介質制備方法，其特征在于，所述制備介質所使用的活化劑可以是環氧氯丙烷、二乙烯砜、羰基二咪唑或其它能活化基質的試劑。

7.根據權利要求1，所述介質用于以親和層析色譜和擴展床吸附法分離純化抗體。