[發明專利]一種紅鳳菜蛋白提取物及其制備方法與應用

無效

• 申請號: 201210200771.6
• 申請日: 2012-06-18
• 公開（公告）號: CN102690324A
• 公開（公告）日: 2012-09-26
• 發明（設計）人: 李維林;任冰如;馬麗;梁呈元;吳菊蘭;陳劍;呂寒
• 申請（專利權）人: 江蘇省中國科學院植物研究所
• 主分類號: C07K2/00
• 分類號: C07K2/00;C07K1/30;A23L1/29;A61K38/02;A61P3/10
• 代理公司: 南京匯盛專利商標事務所(普通合伙) 32238
• 代理人: 裴詠萍

技術領域

????本發明具體涉及一種紅鳳菜蛋白提取物及其制備方法與應用。

背景技術

????紅鳳菜（Gynura?bicolor?DC.）為菊科三七草屬多年生草本植物，主要分布于我國南方各地。紅鳳菜別名血皮菜、觀音菜、觀音莧、紫背天葵?等，可作蔬菜食用，具有一定的降血糖作用，部分地區有少量栽培。目前對于紅鳳菜降血糖作用的研究還不完善，從紅鳳菜中分離得到的主要化學成分為黃酮類成分，這些黃酮類成分又以山柰酚、槲皮素、蘆丁、異槲皮素及其苷類為主，均為常見的黃酮類化學成分，無特別顯著的降血糖效果。

發明內容

本發明的目的是為了解決現有技術中存在的缺陷，提供一種具有顯著抑制α-葡萄糖苷酶活性、從而達到降血糖效果的紅鳳菜蛋白提取物及其制備方法以及在保健品或藥物制備方面的應用。

為了達到上述目的，本發明提供了一種紅鳳菜蛋白提取物，以紅鳳菜植物的新鮮葉片為原料，通過蛋白提取方法制備得到。

上述蛋白提取方法為采用Tris-HCl緩沖液提取、硫酸銨鹽析法沉淀。Tris-HCl緩沖液濃度為20-100?mmol/L，pH值為7.50-8.80；提取緩沖液中含有苯甲基磺酰氟（PMSF）、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-Na₂）、二硫蘇糖醇（DTT）、維生素C（Vc）和氯化鈉（NaCl）；PMSF的濃度為0.01-1?mmol/L，PVP的質量百分濃度為0.1-1%，EDTA-Na₂的濃度為0.2-2?mmol/L，DTT的濃度為2-50?mmol/L，Vc的濃度為1-10mmol/L，NaCl的質量百分濃度為0.5-1%；緩沖液的加入量為每克紅鳳菜新鮮葉片加入5-10毫升緩沖液。硫酸銨鹽析法沉淀為依次在硫酸銨的飽和度為20%、50%和80%下進行分級沉淀，分別得到0-20%飽和度的蛋白提取物、20-50%飽和度的蛋白提取物以及50-80%飽和度的蛋白提取物；0-20%飽和度的蛋白提取物或50-80%飽和度的蛋白提取物為得到的紅鳳菜蛋白提取物。

本發明還提供了該紅鳳菜蛋白提取物的制備方法，包括以下步驟：

（1）提取：取紅鳳菜的新鮮葉片，加入預冷的提取緩沖液，勻漿，在4℃提取20min，過濾，取濾液，離心，得到的上清液即為提取液；提取緩沖液是濃度為20-100?mmol/L的Tris-HCl緩沖液，pH值為7.50-8.80；提取緩沖液中含有苯甲基磺酰氟（PMSF）、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-Na₂）、二硫蘇糖醇（DTT）、維生素C（Vc）和氯化鈉（NaCl）；PMSF的濃度為0.01-1?mmol/L，PVP的質量百分濃度為0.1-1%，EDTA-Na₂的濃度為0.2-2?mmol/L，DTT的濃度為2-50?mmol/L，Vc的濃度為1-10mmol/L，NaCl的質量百分濃度為0.5-1%；緩沖液的加入量為每克紅鳳菜新鮮葉片加入5-10毫升緩沖液；

（2）鹽析法沉淀：將步驟（1）中得到的提取液，加入硫酸銨，使飽和度達20-80%，在4℃沉淀10-30min后，離心；

（3）透析：取步驟（2）中離心得到的沉淀，加入溶解緩沖液（10-50?mmol/L?Tris-HCl，pH7.50-8.80，含2-50?mmol/L?DTT），使沉淀完全溶解，將溶液裝入透析袋中進行透析，得到蛋白質溶液；

（4）冷凍干燥：將步驟（3）制得的蛋白質溶液進行冷凍干燥，所得干燥粉末即為紅鳳菜蛋白提取物。

步驟（2）中所述的硫酸銨的飽和度為20%，沉淀10min，離心15min，取沉淀，即得0-20%飽和度的蛋白提取物；所述離心的轉速為10000rpm，溫度為4℃。或該鹽析法為分級沉淀法，具體步驟如下：在提取液中加入硫酸銨使飽和度達20%，4℃放置10min后，離心15min；取上清液，加入硫酸銨使飽和度達50%，4℃放置10min后，離心15min；取上清液，繼續加入硫酸銨使飽和度達80%，4℃放置10min后，離心15min?，取沉淀，得到50-80%飽和度的蛋白提取物；離心的速度為10,000?rpm，溫度為4℃。

本發明還提供了該紅鳳菜蛋白提取物在制備抑制α-葡萄糖苷酶抑制劑類的保健品或藥物上的應用。