[發明專利]豬脂肪特異性磷脂酶A2基因啟動子

有效

• 申請號: 201210200635.7
• 申請日: 2012-06-18
• 公開（公告）號: CN103421779A
• 公開（公告）日: 2013-12-04
• 發明（設計）人: 熊遠著;張子見;徐德全;左波;雷明剛
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;A01K67/027
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 張紅兵

發明領域

本發明屬于動物基因工程領域，具體涉及一種豬脂肪特異性磷脂酶A2基因啟動子，該啟動子可以作調控目的基因豬脂肪特異性磷脂酶A2的特異性表達。

發明背景

啟動子是一段位于結構基因5′端上游區域的DNA序列，能活化RNA聚合酶，使之與模板DNA準確地結合并具有轉錄起始的特異性，控制基因表達（轉錄）的起始時間和表達的程度。

在真核生物中，結構基因的核心啟動子是能與由RNA聚合酶II組成的前起始復合物結合而啟動基因轉錄的最短的一段連續DNA序列。通常情況下，核心啟動子包括轉錄起始位點及其約40bp的上游和/或下游區域。核心啟動子基序一般包括TATA框（TATA?box）、起始子（initiator，Inr)、TFIIB識別元件（TFIIB?recognition?element，BRE）、下游核心啟動子元件（downstream?core?promoter?element，DPE）以及基序十元件（Motif?Ten?Element，MTE）等。起始子是一包含轉錄起始位點的最常見的核心啟動子基序，在哺乳動物中發現其核心序列為YYANWYY，其中“A”處一般定義為是+1，為轉錄起始位點。雖然有幾種因子都能識別起始子，但TFIID因子的作用最重要。TATA框，又名戈德堡霍格內斯盒(Goldberg-Hogness?box)，是第一個被發現的真核生物核心啟動子元件，但在哺乳動物中只有10-15%的啟動子中發現TATA框。在多細胞動物的TATA框的共有序列為TATAWAAR，其序列中上游“T”通常位于轉錄起始位點上游31bp或30bp處。TATA框可以被TFIID復合物的亞單位TBP蛋白識別，并與之結合。TFIIB識別元件是TFIIB結合序列，緊挨著TATA框，根據其與TATA框的相對位置分為TFIIB上游識別元件（upstream?TFIIB?recognition?element，BREu）和TFIIB下游識別元件（downstream?TFIIB?recognition?element，BREd）。TFIIB識別元件一般都與TATA框一起發揮作用。下游核心啟動子元件是位于起始子下游的TFIID識別序列，其核心序列為RGWYV，一般位于轉錄起始位點下游28～32bp處。

基序十元件位于下游核心啟動子元件的上游，即轉錄起始位點下游18～27bp處，也是TFIID的識別位點。

近些年來，隨著豬基因組學的研究深入，人們已經對豬部分重要功能基因的啟動子轉錄調控進行了研究。但其轉錄調控研究剛剛起步，還有許多問題有待解決。

豬脂肪特異性磷脂酶A2基因ADPLA即adipose-specific?phospholipase?A2，又稱PLA2G16（phospholipase?A2，group?XVI）、H-rev107、HRASLS3（HRAS-like?suppressor?3），由于活化的HRAS基因將會促使大鼠成纖維細胞向惡性方向轉化，在1994年研究抗惡性轉化過程中發現H-rev基因特異性表達，從而首次將其分離出來。因此，H-rev107基因在之后很大長段時間內被作為腫瘤抑制因子去研究，而且研究表明H-rev107基因確實在各種腫瘤細胞系中低表達或不表達。直到近幾年才發現該基因在脂肪組織中有著重要的作用，與脂類代謝密切相關，發現其能通過自分泌或旁分泌調控脂解。

2008年，Duncan等發現了一種新的、細胞內的、與膜相關的、鈣依賴性磷脂酶A2（PLA2）。序列分析顯示它就是H-Rev-107/HRASLS3，一種腫瘤抑制因子，但由于研究表明它在白色脂肪組織中特異性高表達且在前脂肪細胞分化成脂肪細胞的過程中被誘導，故將命名為adipose-specific?phospholipase?A2（ADPLA）。研究者還發現，雖然ADPLA與卵磷脂視黃醇酰基轉移酶（Lecithin?retinol?acyltransferase，LRAT）在序列上具有高度同源性，但是分析ADPLA的酶活性時，結果顯示其水解產物是游離脂肪酸（free?fatty?acid，FFA）和溶血性磷脂酰膽堿（lysophosphatidylcholine，LPC）而不是三酰甘油（triacylglycerol，TAG），同時，還發現了它的最適反應位置是sn-2，這些都說明了ADPLA是一種PLA2，但進行序列、抑制因素及突變和缺失等分析時發現它與現存的各類PLA2都是不盡相同，這就表明ADPLA可能是一種新的磷脂酶A2，不屬于之前所定義的幾種類型，故將其歸納為PLA2G16的第一個新成員。