[發明專利]一種利用細胞脫壁試劑評測細胞貼壁強度的方法

有效

• 申請號: 201210199358.2
• 申請日: 2012-06-18
• 公開（公告）號: CN102703570A
• 公開（公告）日: 2012-10-03
• 發明（設計）人: 李京寶;商澎;王蒙;王佳;李亞楠;騫愛榮
• 申請（專利權）人: 西北工業大學
• 主分類號: C12Q1/06
• 分類號: C12Q1/06
• 代理公司: 西北工業大學專利中心 61204
• 代理人: 王鮮凱

1.一種利用細胞脫壁試劑評測細胞貼壁強度的方法，其特征在于步驟如下：

步驟1：以3～5×10⁴個/cm²的密度在細胞培養板中的多個孔中接種細胞，置于37℃細胞培養箱中培養24h，使其充分貼壁；

步驟2：將細胞脫壁試劑進行倍半稀釋，得到一組脫壁試劑溶液濃度，各脫壁試劑溶液的濃度梯度的稀釋倍數分別為2⁰、2¹、2²、2³、2⁴、2⁵、2⁶；

步驟3：吸干細胞培養板中的培養基，分別將一組脫壁試劑溶液中的每個脫壁試劑溶液濃度和磷酸鹽緩沖液PBS加入細胞培養板中不同的孔內，溫育5～20min，進行充分反應；溫育5～20min，進行充分反應；

步驟4：將細胞固定液加入細胞培養板中，然后將細胞培養板置于振蕩器或搖床上，震蕩5～50min，以使細胞充分固定；

步驟5：檢測每個孔內中仍貼壁的細胞的數量，并以PBS處理組的檢測值為標準值，做歸一化分析，得出一組脫壁試劑溶液濃度梯度的貼壁細胞比例N_A；

重復步驟3～步驟5：每個濃度梯度處理組做3個以上的重復；再做一組不吸干培養基的陰性對照，作為細胞接種數誤差的對照；所述磷酸鹽緩沖液PBS和脫壁試劑濃度溶液的體積一樣；

步驟6：對細胞貼壁強度評測

1．以各濃度梯度處理組的N_A值為橫坐標，以各N_A值對應的脫壁試劑稀釋倍數D為縱坐標得到曲線圖，以最小二乘法擬合曲線公式，得到N_A=F(D)；

2．選取¹/₂N_A（PBS）為標準，代入上述曲線公式N_A=F(D)，計算出此時對應的脫壁試劑稀釋倍數，D_50％，并以D_50％表征此種細胞的貼壁強度。

2.根據權利要求1所述利用細胞脫壁試劑評測細胞貼壁強度的方法，其特征在于：

所述的細胞固定液和脫壁試劑均采用PBS作為溶劑配制。

3.根據權利要求1所述利用細胞脫壁試劑評測細胞貼壁強度的方法，其特征在于：

所述細胞脫壁試劑為0.025％～0.5％的胰酶溶液或0.01％～0.2％的EDTA溶液。