[發(fā)明專利]一種新型酯酶及其應用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210196902.8
• 申請日: 2012-06-14
• 公開（公告）號: CN102732539A
• 公開（公告）日: 2012-10-17
• 發(fā)明（設計）人: 劉玉煥;范新炯
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: C12N15/55
• 分類號: C12N15/55;C12N9/18;C12N15/10;C12N15/70
• 代理公司: 廣州知友專利商標代理有限公司 44104
• 代理人: 宣國華

1.一種新型酯酶基因Est112，其特征是：它的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

2.與權利要求1限定的新型酯酶的基因序列具有85%以上的同源性且編碼所述蛋白的DNA分子。

3.一種新型酯酶蛋白，其特征是：它的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.3所示。

4.與權利要求3所述新型酯酶蛋白的氨基酸序列具有85%以上的同源性且編碼所述蛋白并具有N-酰基高絲氨酸內酯酶活性的衍生蛋白質。

5.權利要求1所述的新型酯酶基因Est112的宏基因組學克隆方法，其特征是：提取吐魯番土壤樣品的總DNA并純化，將純化后的總DNA經BamHI酶切，連接pUC118載體，電擊轉化大腸桿菌DH5α高效感受態(tài)建立宏基因組文庫，通過原創(chuàng)平板顯色法快速篩選得到陽性克隆子，經測序和BLAST比較并設計SEQ?ID?NO：4和SEQ?ID?NO：5中的引物，從而克隆到目的片段。

6.一種新型酯酶表達載體，其特征是：是含有權利要求1中所述的新型酯酶基因Est112的表達載體pET-28a(+)-Est112。

7.一種重組酯酶的制備方法，其特征是：包括用權利要求5所述的新型酯酶表達載體轉化寄主細胞，培養(yǎng)轉化體，從培養(yǎng)物中獲得重組酯酶。

8.根據權利要求7所述的重組酯酶的制備方法，其特征是：所述的寄主細胞為大腸桿菌。

9.根據權利要求8所述的重組酯酶的制備方法，其特征是：其具體過程為：包括用權利要求5所述的新型酯酶表達載體轉化至寄主細胞大腸桿菌BL21，經IPTG誘導，得到高效可溶性表達的重組酯酶。

10.根據權利要求9所述的重組酯酶的制備方法，其特征是：所述的IPTG終濃度為0.1~1.5mM，誘導溫度為18～37℃。

11.一種重組酯酶，其特征是：包括用權利要求6所述的新型酯酶表達載體轉化的寄主細胞，培養(yǎng)轉化體，從培養(yǎng)物中獲得重組酶的步驟的方法制備。

12.權利要求11所述的重組酯酶在降解信號分子N-酰基高絲氨酸內酯AHLs方面的應用。