[發明專利]一種食品中2-萘胺的酶聯免疫吸附檢測方法

無效

• 申請號: 201210189970.1
• 申請日: 2012-06-11
• 公開（公告）號: CN102680675A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發明（設計）人: 匡華;尹玉云;彭池方;胥傳來;王利兵;王文斌
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: G01N33/536
• 分類號: G01N33/536;G01N21/78
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所 32104
• 代理人: 時旭丹;劉品超

1.一種食品中偶氮染料的還原物2-萘胺的酶聯免疫吸附檢測方法，其特征在于：

（1）抗原的包被

將2-萘胺與卵清蛋白OVA重氮化法偶聯，并以此偶聯復合物作為包被抗原，以0.05?M、pH?9.6的碳酸鈉緩沖液稀釋包被抗原，抗原稀釋倍數分別為2000、4000、8000、16000倍，向酶標板的每孔中加入上述不同稀釋倍數的包被液100μL，4℃孵育過夜，用添加有2％明膠的上述包被緩沖液作為封閉液封閉；

（2）競爭反應

將免疫制備的2-萘胺多克隆抗體用抗體稀釋液分別稀釋1000、3000、9000倍后，加入酶標板中，每孔加50μL，同時分別加入濃度為0?ng/mL，2?ng/mL，5?ng/mL，10?ng/mL，20?ng/mL，50?ng/mL，100?ng/mL的2-萘胺標準品，每孔加入50μL，37℃孵育1h，然后用PBST洗滌液置于搖床上洗滌3次，每次3min；

所述洗滌液PBST：為含有0.05%吐溫-20的0.01M、pH7.4的磷酸鹽緩沖液；

抗體稀釋液：含0.1%明膠的PBST溶液；

（3）加酶標二抗

加入辣根過氧化物酶標記的羊抗兔抗體GAR-HRP，用抗體稀釋液進行5000倍稀釋，每孔加入100μL，37℃溫育1h，以PBST置于搖床上洗滌3次，每次3min；

（4）顯色

向酶標板的各孔中分別加入100?μL顯色液，于37℃恒溫箱中反應15?min，取出酶標板，向每孔加入100?μL終止液2?mol/L的硫酸，用酶標儀測定450nnm處的吸光值A₄₅₀。

2.根據權利要求1所述的2-萘胺酶聯免疫吸附檢測方法，其特征在于，PBST洗滌液的配方為1000?mL蒸餾水中加入氯化鈉8?g、磷酸二氫鉀0.24?g、磷酸氫二鈉3.62?g、氯化鉀0.2g、和吐溫-20?0.5?mL。

3.根據權利要求1所述的2-萘胺酶聯免疫吸附檢測方法，其特征在于，顯色液由A液和B液兩種溶液構成，A液配方為9.33?g檸檬酸，36.8?g?Na₂HPO₄·12H₂O，180?μL?30%的H₂O₂，用超純水定容至1L；B液配方為600?mg四甲基聯苯胺溶于1L乙二醇，并超聲振蕩幾分鐘，然后分裝使用；二者均貯于4℃冰箱中保存，使用時將A液和B液以A︰B=5︰1的體積比混勻。