[發(fā)明專利]動脈粥樣硬化易感基因無創(chuàng)檢測試劑盒

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210188259.4
• 申請日: 2012-06-09
• 公開（公告）號: CN103468788A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發(fā)明（設計）人: 鄭俊斌
• 申請（專利權）人: 解碼(上海)生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本專利屬于分子生物學領域，涉及醫(yī)學和生物技術，具體涉及一種動脈粥樣硬化易感基因無創(chuàng)檢測試劑盒，根據(jù)檢測結(jié)果從基因?qū)用嬖u估動脈粥樣硬化遺傳易感性的風險級別，并作為預防動脈粥樣硬化的建議指導。?

背景技術

動脈硬化是以動脈壁增厚、變硬和彈性減退為特征的一類血管病。動脈粥樣硬化屬于其中最為常見且危害性最大的一類。其主要特征為受累動脈內(nèi)膜出現(xiàn)脂類和復合糖類的沉著和積聚，并出現(xiàn)纖維組織增生和鈣質(zhì)沉著。由于動脈內(nèi)積聚的脂類物質(zhì)成黃色小米粥樣，故而被稱為動脈粥樣硬化。常常會導致血栓形成和供血障礙等，嚴重時可導致由受累動脈負責供血的組織或器官缺血甚至壞死，是目前老年人病死的主要原因之一。

動脈粥樣硬化通常是由于脂肪代謝紊亂以及神經(jīng)血管功能失調(diào)所引起的。其發(fā)生除了肥胖、吸煙、缺乏運動以及患有高血壓、高血脂等原因外，遺傳因素也是不容忽視的重要因素。有統(tǒng)計結(jié)果表明，許多動脈粥樣硬化的患者都有動脈粥樣硬化、糖尿病以及腫瘤病和精神分裂癥等家族病史。有研究結(jié)果也顯示血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(?ACE?)、脂蛋白脂酶（LPL）、亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)?等基因的多態(tài)性均與動脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展有直接關聯(lián)。

腎素-血管緊張素系統(tǒng)在動脈粥樣硬化的發(fā)生與發(fā)展中扮演著重要的角色。其中的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(?ACE?)負責將血管緊張素I轉(zhuǎn)化為有生物活性的血管緊張素II。ACE第16內(nèi)含子中由287個堿基對組成的Alu重復序列的存在（I）或缺失（D）被稱為插入/缺失（I/D）多態(tài)性。該多態(tài)性是決定循環(huán)ACE活性的主要因素。ACE的DD基因型可導致較高水平的血管緊張素II，從而導致纖溶酶原激活物抑制物1的水平增高，繼而促使血栓形成，被視為動脈早期粥樣硬化的一種潛在危險因素。

脂蛋白脂酶（LPL）是脂類代謝的關鍵酶，主要負責水解極低密度脂蛋白和乳糜微粒中的甘油三酯。轉(zhuǎn)化產(chǎn)生的小分子脂肪酸可供各組織貯存、利用。在動脈粥樣硬化過程中，LPL發(fā)揮著雙重的作用。一方面，LPL可以降低血漿中的甘油三酯并增加高密度脂蛋白水平，從而可以抑制動脈粥樣硬化。但同時，血管壁上的LPL所產(chǎn)生的富含膽固醇的裂解產(chǎn)物及脂肪酸被巨噬細胞攝取后可轉(zhuǎn)變?yōu)榕菽毎疫€會刺激血管壁平滑肌細胞增生使動脈壁變厚，加速動脈粥樣硬化的形成。位于LPL內(nèi)含子8區(qū)的Hind?III酶切位點多態(tài)性已發(fā)現(xiàn)與動脈粥樣硬化有密切關聯(lián)。Hind?III（+/+）的基因型頻率在患者中要顯著高于對照組。但其對動脈粥樣硬化的具體影響機制目前仍存在爭議。多數(shù)研究認為Hind?III（+/+）基因型會導致血漿中甘油三酯水平上升，使動脈壁增厚。

亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)是同型半胱氨酸（Hcy）代謝途徑中的關鍵酶。MTHFR基因的第677位C→T突變（C677T）會使編碼的氨基酸從纈氨酸變?yōu)楸彼幔瑥亩绊懨傅幕钚约盁岱€(wěn)定性并使血漿中同型半胱氨酸濃度升高。而高Hcy血癥是動脈粥樣硬化的一個獨立危險因素。因此MTHFR也屬于動脈粥樣硬化的易感基因之一。

建立簡單、快速的動脈粥樣硬化易感基因無創(chuàng)檢測方法，能夠用于檢測與動脈粥樣硬化發(fā)生相關的基因單核苷酸位點基因型，及時篩查出易患動脈粥樣硬化的高危人群，從而根據(jù)檢測結(jié)果盡早采取預防措施，這對于降低動脈粥樣硬化發(fā)病率有非常重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

基于ACE基因上I/D?(rs4646994)、MTHFR基因上C677T(rs1801133)、LPL基因上HindIII?(rs320)的3個單核苷酸多態(tài)性位點基因型可用來評估動脈粥樣硬化發(fā)病風險級別，本發(fā)明提供一種動脈粥樣硬化基因無創(chuàng)檢測試劑盒。

該試劑盒包括：

檢測ACE基因上I/D?(rs4646994)、MTHFR基因上C677T(rs1801133)、LPL基因上HindIII?(rs320)的3個單核苷酸多態(tài)性位點基因型的特異性引物對及DNA測序引物；

PCR反應組件（包括Taq酶、dNTP混合液、反應緩沖液、ddH2O等）；

PCR產(chǎn)物純化組件（包括SAP酶、ExoI酶、ddH2O等）；

DNA測序反應組件（包括BigDye?mix，EDTA溶液、100%乙醇溶液、70%乙醇溶液、HIDI溶液、ddH2O等）。

本發(fā)明試劑盒的組分和含量包括：