[發明專利]小分子魚皮膠原蛋白肽的提取制備方法

有效

• 申請號: 201210187819.4
• 申請日: 2012-06-08
• 公開（公告）號: CN102703555A
• 公開（公告）日: 2012-10-03
• 發明（設計）人: 翁武銀;王寶周;曹敏杰;劉光明;蘇文金
• 申請（專利權）人: 集美大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K2/00;C07K1/36;C07K1/34
• 代理公司: 廈門市新華專利商標代理有限公司 35203
• 代理人: 朱凌

技術領域

本發明涉及一種利用淡水魚皮提取小分子膠原蛋白肽的制備領域，特別涉及一種利用控制酶解法、膜分離法、活性炭結合樹脂脫色法制備無色無味小分子魚皮膠原蛋白肽的提取制備方法。

背景技術

一般，小分子膠原蛋白肽可以作為有效成分被廣泛應用于醫藥、高檔化妝品、保健食品等與人體健康相關的行業。目前，國內外用于制備小分子膠原蛋白肽的原料主要來源于豬皮和牛皮。然而，由于對瘋牛病、豬口蹄疫的恐慌以及宗教信仰等原因，以水產加工廢棄物尤其利用魚皮制備小分子膠原蛋白肽不斷受到關注。據報道，小分子膠原蛋白肽易于消化吸收，具有保護胃粘膜防止胃潰瘍，促進鈣吸收防治骨質疏松，促進皮膚膠原代謝，抑制血壓上升，以及降低血清中膽固醇含量等多方面的生理功能，導致市場對膠原蛋白的需求量不斷增加。

目前，利用以魚皮為原料制備小分子膠原蛋白肽在國內外已經有了大量的研究和報道。在膠原蛋白肽的提取方法中，利用蛋白酶對膠原蛋白進行酶解不僅效率高、而且產品的分子量分布容易控制，因此酶解提取法被廣泛應用于工業化生產。然而，由于蛋白酶價格昂貴，如果沒有對提取工藝進行合理設計，不僅需要添加大量的蛋白酶，而且酶解時間長，造成生產成本偏高，產品分子量分布廣。另一方面，利用魚皮制備的小分子膠原蛋白肽都存在顏色深、帶有魚腥味，導致應用范圍受到限制。

發明內容

本發明的目的在于提供一種生產周期較短、生產成本較低的無色無味小分子魚皮膠原蛋白肽的提取制備方法。

利用控制酶解法提取無色無腥味的小分子魚皮膠原蛋白肽的制備方法，它是以淡水魚的魚皮為原料，將其制備成小分子膠原蛋白肽的方法。

為了實現上述目的，本發明的技術方案是：?

本發明是一種小分子魚皮膠原蛋白肽的提取制備方法，它包括以下步驟：(1)?粗膠原蛋白的制備：以淡水魚的魚皮為原料，用2-5倍原料重的含有20%?(v/v)無水乙醇的堿性溶液浸泡12-24h去除雜蛋白和脂肪后用清水漂洗至中性，利用5-10倍原料重的酸性溶液攪拌浸泡1-3h，再用清水漂洗至pH為3-5后，磨碎制備成粗膠原蛋白；(2)膠原蛋白的加熱水解：對磨碎的粗膠原蛋白加熱水解；(3)?膠原蛋白的內切酶酶解：加熱水解的膠原蛋白溶液降溫至45-60°C，將溶液的pH調整至8.0-9.0，加入0.02-0.1%?(w/w)原料重量的內切酶對膠原蛋白進行酶解；(4)?膠原蛋白的外切酶酶解：將內切酶酶解的膠原蛋白溶液的pH調整至5.0-6.0，加入0.1-0.5%?(w/w)原料重量的內切酶進行酶解制備成膠原蛋白肽溶液；(5)蛋白酶的回收和利用：膠原蛋白肽溶液經過超濾膜，將蛋白酶和未完全酶解的高分子膠原蛋白截留并添加到步驟(4)中繼續使用；(6)滅酶、脫鹽、濃縮：利用90-100°C對超濾獲得的濾液加熱5-15min進行滅酶，然后利用納濾膜進行脫鹽、濃縮；(7)脫色、脫腥：在步驟(6)處理獲得的小分子膠原蛋白肽濃縮液中加入溶液重量的0.5-2.0%(w/w)的活性炭進行脫色脫腥，接著利用碟式離心機去除活性炭，再利用樹脂脫色脫腥；(8)?小分子膠原蛋白肽粉末的制備：將步驟(7)脫腥脫色的膠原蛋白肽溶液通過噴霧干燥，制備成小分子膠原蛋白肽粉末。

在步驟(1)中，所述的堿性溶液浸泡條件為：堿性溶液為0.01-0.05?M?NaOH溶液；浸泡溫度為4-20°C。

在步驟(1)中，所述的酸性溶液浸泡條件為：酸性溶液為0.05-0.20?M?HCl溶液；浸泡溫度為4-20°C。

在步驟(2)中，所述的膠原蛋白加熱水解的條件為：在90-100?°C下加熱30-60?min。

在步驟(3)中，所述的內切酶為：膠原蛋白酶、堿性蛋白酶、胰蛋白酶或胰凝乳蛋白酶中的一種或組合。

在步驟(3)中，所述的膠原蛋白內切酶酶解條件為：在45-55?°C下酶解1-4?h。

在步驟(4)中，所述的外切酶為木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶、中性蛋白酶中的一種或組合。

在步驟(4)中，所述的膠原蛋白外切酶酶解條件為：在45-55?°C下酶解1-4?h。

在步驟(5)中，所述的超濾膜的規格為：截留分子量為2000-5000道爾頓。

在步驟(6)中，所述的納濾膜的規格為：截留分子量為200道爾頓。

在步驟(7)中，所述的活性炭脫色脫腥條件為：膠原蛋白肽溶液的pH調整至4.5-6.0，在30-40°C下保溫15-60min。

在步驟(7)中，所用的脫色脫腥樹脂可以為離子交換樹脂、吸附樹脂或鰲合樹脂中的任一種。