[發明專利]1型登革熱快速金標診斷試紙條

無效

• 申請號: 201210186551.2
• 申請日: 2012-06-02
• 公開（公告）號: CN102778565A
• 公開（公告）日: 2012-11-14
• 發明（設計）人: 嚴延生;張志珊
• 申請（專利權）人: 嚴延生
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;C12N15/70;C12P21/02;C07K14/18;C07K1/26;C12R1/19;C12R1/93
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技術領域

本發明涉及疾病診斷的抗原，具體說是一種用于1型登革熱血清學診斷的重組抗原及其快速金標診斷試紙條。

背景技術

登革熱是一種由伊蚊傳播的病毒性傳染病，主要流行于東南亞、美州等熱帶、亞熱帶國家和地區，一百多個國家有地方性登革熱傳播，每年均出現幾百萬病例，是全球性公共衛生問題。近年來，我國東南沿海省份常年有輸入性病例報告，且由此造成的本地擴散及暴發流行越來越頻繁。由于登革熱主要的傳播媒介-白蚊伊蚊在國內分布廣泛，因此其傳播速度快，容易造成不良的社會影響，同時對當地的經濟發展，特別是旅游業的發展造成沖擊，我國已將登革熱列為重點控制的傳染病之一。由于缺乏有效的登革疫苗，加強登革熱實驗室準確快速的檢測，及時發現、控制傳染源，對于控制疫情起著至關重要的作用。

目前登革熱的實驗室診斷主要包括病毒分離、基因診斷技術和血清學檢測。由于登革熱的病毒血癥期很短，通常在發熱前2-3天到發熱開始4-5天內，因此病毒分離和基因診斷受到標本采集時間的限制，同時對設備、實驗室條件及人員素質要求很高，不利于推廣。傳統的血清學方法主要包括血凝抑制實驗、補體結合實驗、中和實驗和免疫熒光法。但這些方法大多敏感性和特異性不高，且操作繁煩，有的需要特殊檢測設備，目前已較少應用。而ELISA法、免疫層析法具有較高的敏感性和特異性，且操作簡便快速，是目前大多數實驗室采用的主要方法。國外已有多個國家生產銷售此類試劑盒，但大多數質量不盡人意，僅以澳大利亞Panbio公司生產的檢測試劑盒質量最好，該試劑也是目前國內實驗室采用的主要試劑。但其價格昂貴，一般實驗室難以承受，且運送時間長，難以應對突發事件。而國內尚沒有商業化的試劑盒面市。

登革病毒屬于黃病毒科黃病毒屬，可分為四種血清型。早期的診斷試劑盒主要采用全病毒或病毒裂解液作為捕獲抗原，檢測血清中的登革病毒抗體，但由于與其它蟲媒病毒存在交叉反應，特異性差，已逐漸被重組抗原所替代。外膜蛋白(E蛋白)是登革病毒主要的結構蛋白，全長500個氨基酸左右，E蛋白能和宿主細胞表面受體相互作用從而在病毒入侵過程中起至關重要的作用，還能誘導宿主產生保護性的中和抗體。E蛋白可分為三個結構區(DI、DII、DIII)，DIII區包括殘基300～400，由唯一的一個二硫鍵穩定其結構，含有多個中和表位和宿主細胞受體識別位點，能誘導病毒中和抗體和血凝抑制抗體的產生。該多肽區不僅含有群特異性表位，還含有登革病毒型特異性表位，可用于病毒血清型的鑒別。

膠體金是一種處于半還原狀態的懸浮顆粒，能迅速吸附蛋白質等大分子而不影響其活性，膠體金具有易分辨的紅至紫紅色，在與大分子結合后，易于用肉眼識別，不需二級放大即可直接觀察結果，膠體金診斷產品因而可直接進入沒有復雜檢測設備的診所甚至家庭里。近年來，以早孕檢測試紙為代表的膠體金免疫診斷試劑已進入千家萬戶，給人們的生活帶來很大的方便。

從包括中國專利等有關資料檢索表明，目前尚未有利用基因工程方法獲得高表達、高活性的外膜蛋白DIII區重組抗原用于同時檢測登革病毒感染者血清中IgM、IgG抗體的金標快速診斷試紙條的相關報道。

發明內容

為了彌補現有技術的不足，本發明的目的是要提出一種用于1型登革熱診斷的外膜蛋白DIII區重組抗原及可同時檢測1型登革病毒感染者血清中IgM、IgG抗體的快速金標診斷試紙條。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：

一.溶液配方：

(1)重組抗原溶解液：SDS????????0.1％

???????????????????甘氨酸?????250mmol/L

???????????????????Tris.Cl????25mmol/L

(2)膠體金溶液：0.03～0.05％的四氯金酸，加1～2％檸檬酸三鈉制備成膠體金顆粒；

(3)二抗：羊抗人IgG單抗、羊抗人μ鏈單抗，羊抗鼠IgG單抗由廈門波生生物技術有限公司研制；

(4)包被緩沖液：含1～3％蔗糖的磷酸鹽緩沖液；

(5)基礎緩沖液：由廈門波生生物技術有限公司研制，主要含牛血清白蛋白的緩沖液；

(6)反應緩沖液：含0.01～0.05％NaN₃的磷酸鹽緩沖液；