[發明專利]一種豬流感滅活疫苗的效價測定方法

有效

• 申請號: 201210186169.1
• 申請日: 2012-06-07
• 公開（公告）號: CN102735853A
• 公開（公告）日: 2012-10-17
• 發明（設計）人: 葉賀佳;仇微紅;梁昭平;廖明;羅開健;王斌;李敏;孫招金
• 申請（專利權）人: 廣州市華南農大生物藥品有限公司;華南農業大學
• 主分類號: G01N33/86
• 分類號: G01N33/86
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 譚英強

1.一種豬流感滅活疫苗的效價測定方法，包括如下步驟：

1)使用豬流感滅活疫苗免疫豬，免疫后21～28日后采血分離血清；

2)去除血清中的非特異性成分，得到待檢血清；

3)將豬流感滅活抗原稀釋，配制濃度為4?HA單位豬流感抗原稀釋液；

4)將待檢血清稀釋，將血清稀釋液與4?HA單位豬流感抗原稀釋液、紅細胞混合，進行血凝抑制實驗，以完全抑制4?HA單位豬流感抗原的血清最高稀釋度為HI效價。

2.根據權利要求1所述的豬流感滅活疫苗的效價測定方法，其特征在于：所述方法包括如下步驟：

1)使用豬流感滅活疫苗免疫豬，免疫后21～28日后采血分離血清；

2)將血清與受體破壞酶（RDE）混合，37℃水浴去除血清中非特異性成分；

3)將血清移至56℃水浴30min滅活殘留的RDE，加入雞紅細胞，20～25℃下吸附血清中殘余的非特異性成分；

4)將去除了非特異性成分的血清離心，取上清，上清即為待檢血清；

5)將豬流感滅活抗原進行稀釋，之后加入雞紅細胞懸液，在血凝板震蕩均勻后于20～25℃下靜置20～30?min，以紅細胞完全凝集的最高稀釋倍數為血凝價；

6)根據測得的血凝價配制濃度為4?HA單位豬流感抗原稀釋液；

7)將待檢血清稀釋，加入4?HA單位豬流感抗原稀釋液和雞紅細胞，同時設置陰性對照，進行血凝抑制實驗，以完全抑制4?HA單位豬流感抗原的血清最高稀釋度為HI效價。

3.根據權利要求2所述的豬流感滅活疫苗的效價測定方法，其特征在于：步驟3）中，加入雞紅細胞使血清中紅細胞的體積濃度為5%～20%。

4.根據權利要求2所述的豬流感滅活疫苗的效價測定方法，其特征在于：步驟5）和7）中，雞紅細胞的體積濃度為1%。