[發明專利]三七總皂苷的微生物發酵提取方法

有效

• 申請號: 201210185786.X
• 申請日: 2012-06-05
• 公開（公告）號: CN102676627A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發明（設計）人: 沈生榮;于海寧;楊婧娟
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12P33/20
• 分類號: C12P33/20;C12R1/125
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 金祺

1.三七總皂苷的微生物發酵提取方法，其特征是包括以下步驟：

1）、微生物固態發酵：

將三七根粉與作為營養輔料的麩皮按1.5~4:1的重量比混合后作為發酵基質，將發酵基質進行滅菌，得滅菌后發酵基質；

將pH=7~8、且濃度為0.2?mol/L的磷酸鹽緩沖溶液進行滅菌，得滅菌后磷酸鹽緩沖溶液；

按照每g發酵基質配用1~1.4ml的pH=7~8、且濃度為0.2?mol/L的磷酸鹽緩沖溶液的比例；在滅菌后發酵基質中加入滅菌后磷酸鹽緩沖溶液，得發酵底物；

然后在無菌條件下進行以下操作：

按照每g發酵基質配用0.1~0.2?mL枯草芽孢桿菌的菌液的接種量，在發酵底物中加入枯草芽孢桿菌的菌液，攪拌均勻后，于34.8~35.2℃培養90~100h，得發酵曲；

2）、三七總皂苷的提取：

將發酵曲用體積濃度為68~72%的乙醇溶液回流提取，所述乙醇溶液與步驟1）中的發酵基質的用量比為：7.5~8.5ml的乙醇溶液/g發酵基質；回流提取時間為1.2~1.8h；回流提取結束后，離心，分別得首次上清和殘渣；

將殘渣用體積濃度為68~72%的乙醇溶液回流提取，所述乙醇溶液與步驟1）中的發酵基質的用量比為：4.5~5.5ml的乙醇溶液/g發酵基質；回流提取時間為1.2~1.8h；回流提取結束后，離心，得二次上清；

合并首次上清和二次上清，得三七總皂苷提取液。

2.根據權利要求1所述的三七總皂苷的微生物發酵提取方法，其特征是：所述三七根粉為三七根粉碎至能過40目篩。

3.根據權利要求2所述的三七總皂苷的微生物發酵提取方法，其特征是：所述枯草芽孢桿菌的菌液的制備方法為包括如下步驟：

①、將1?g豆粕渣與pH=7~8、且濃度為0.05?mol/L的磷酸鹽緩沖液28~32mL混合，得液體種子發酵培養基，滅菌，得滅菌后液體種子發酵培養基；

②、在無菌條件下，在步驟①所得的滅菌后液體種子發酵培養基中接種1~2環的枯草芽孢桿菌，于140~160rpm、36.8~37.2℃的條件下培養22~26?h；得枯草芽孢桿菌的菌液。

4.根據權利要求1、2或3所述的三七總皂苷的微生物發酵提取方法，其特征是：

所述步驟1）中：

將三七根粉與作為營養輔料的麩皮按7:3的重量比混合；

按照每g發酵基質配用1.2ml的pH=7.5、且濃度為0.2?mol/L的磷酸鹽緩沖溶液的比例；在滅菌后發酵基質中加入滅菌后磷酸鹽緩沖溶液，得發酵底物；

按照每g發酵基質配用0.15?mL枯草芽孢桿菌的菌液的接種量，在發酵底物中加入枯草芽孢桿菌的菌液。