[發(fā)明專利]利用葉柄獲得胭脂花體細(xì)胞再生植株的方法及其培養(yǎng)基

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210185487.6
• 申請(qǐng)日: 2012-06-06
• 公開（公告）號(hào): CN102715083A
• 公開（公告）日: 2012-10-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王俊麗;宋韻霏;劉坤;王前;畢凱麗;張璐;李建飛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中央民族大學(xué)
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;任鳳華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種利用葉柄獲得胭脂花體細(xì)胞再生植株的方法及其培養(yǎng)基。

背景技術(shù)

胭脂花（Primula?maximowiczii），別名段報(bào)春，蒙名為套日格-哈布日西勒-其其格，屬報(bào)春花科（Primulaceae）報(bào)春花屬（Primula），為一種早春開花的多年生草本野生花卉。主要分布于我國東北、華北至西北的亞高山草甸及較高山林地下、林緣和潮濕腐殖質(zhì)豐富的地方，其觀賞價(jià)值高，是一種很有園林開發(fā)價(jià)值的野生花卉。胭脂花還是一種野生的蒙藥藥用植物，據(jù)《新華本草綱要》記載，全草可以入藥，有止痛、祛風(fēng)的功能，可用于治療癲癇頭痛。由于胭脂花分布海拔較高，入藥需求量較大，近年來已日益匱乏。

目前，有關(guān)胭脂花的研究工作主要集中在種子萌發(fā)條件、不同條件對(duì)胭脂花生長發(fā)育的影響、染色體核型觀察及化學(xué)成分等，有關(guān)胭脂花的離體培養(yǎng)研究很少。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種用于獲得胭脂花（Primula?maximowiczii)體細(xì)胞再生植株的成套培養(yǎng)基，含有獨(dú)立包裝的培養(yǎng)基A；所述培養(yǎng)基A為由MS培養(yǎng)基、2,4-二氯苯氧乙酸和噻苯隆制成的固體培養(yǎng)基；所述2,4-二氯苯氧乙酸在所述培養(yǎng)基A中的含量為1.0mg/L—2.0mg/L；所述噻苯隆在所述培養(yǎng)基A中的含量為1.0mg/L—4.0mg/L。

在上述成套培養(yǎng)基中，所述2,4-二氯苯氧乙酸在所述培養(yǎng)基A中的含量具體可為1.0mg/L或2.0mg/L。

在上述成套培養(yǎng)基中，所述噻苯隆在所述培養(yǎng)基A中的含量具體可為1.0mg/L、2.0mg/L或4.0mg/L。

在上述成套培養(yǎng)基中，所述成套培養(yǎng)基還含有獨(dú)立包裝的培養(yǎng)基B；所述培養(yǎng)基B為由MS培養(yǎng)基、2,4-二氯苯氧乙酸和6-芐氨基腺嘌呤制成的固體培養(yǎng)基；所述2,4-二氯苯氧乙酸在所述培養(yǎng)基B中的含量為4.0mg/L，所述6-芐氨基腺嘌呤在所述培養(yǎng)基B中的含量為2.0mg/L。

在上述成套培養(yǎng)基中，所述MS培養(yǎng)基為表1所示的培養(yǎng)基。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種獲得胭脂花（Primula?maximowiczii)體細(xì)胞再生植株的方法，包括將所述胭脂花的葉柄用所述培養(yǎng)基A培養(yǎng)獲得所述胭脂花的不定芽，最后獲得所述胭脂花的再生植株。

在上述方法中，所述胭脂花的葉柄取自株高為2-3cm的所述胭脂花實(shí)生苗。

在上述方法中，還包括將所述胭脂花不定芽用所述培養(yǎng)基B進(jìn)行擴(kuò)繁培養(yǎng)的步驟。

在上述方法中，還包括將所述胭脂花不定芽用不含植物生長調(diào)節(jié)劑的MS培養(yǎng)基進(jìn)行生根培養(yǎng)的步驟。

在上述方法中，所述培養(yǎng)的光照和溫度條件如下：每天24小時(shí)中光照16小時(shí)，光照強(qiáng)度為1500-2000Lux，其余時(shí)間為黑暗，溫度為25℃。

實(shí)驗(yàn)證明，將胭脂花（Primula?maximowiczii)葉柄外植體在含不同濃度植物生長調(diào)節(jié)劑2,4-D（1.0-2.0mg/L）和TDZ（1.0-4.0mg/L）組合的MS培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)，不定芽誘導(dǎo)率在19.0%—52.4%之間，明顯高于含單一的植物生長調(diào)節(jié)劑2，4-D（1.0-4.0mg/L）或TDZ（1.0-4.0mg/L）的MS培養(yǎng)基的不定芽誘導(dǎo)率2.4%—19.0%。在含2,4-D?4.0mg/L和6-BA?2.0mg/L的MS培養(yǎng)基中進(jìn)行不定芽擴(kuò)繁培養(yǎng)，擴(kuò)增系數(shù)可達(dá)9.2。本發(fā)明以胭脂花葉柄為外植體，建立了完整穩(wěn)定的胭脂花體細(xì)胞再生體系，對(duì)有效保護(hù)和利用野生胭脂花資源具有重要價(jià)值。

附圖說明

圖1為本發(fā)明使用的胭脂花（Primula?maximowiczii)無菌實(shí)生苗。

圖2為胭脂花葉柄外植體在不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)14天產(chǎn)生的不定芽。

圖3為胭脂花不定芽經(jīng)擴(kuò)繁培養(yǎng)14天產(chǎn)生的叢生不定芽。

圖4為胭脂花不定芽經(jīng)生根培養(yǎng)獲得的再生苗。

圖5為移栽成活的胭脂花再生植株。

具體實(shí)施方式

下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。

下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。

胭脂花（Primula?maximowiczii）：中央民族大學(xué)；參考文獻(xiàn)：毛娟娟,潘會(huì)堂,唐明.光質(zhì)對(duì)胭脂花幼苗成長的影響.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué).2009,37(17）:7961-7962.

TDZ：中文名稱噻苯隆，化學(xué)名稱N-苯基-N’-1,2,3-噻二唑-5-脲，北京普博欣生物科技有限責(zé)任公司生產(chǎn)，純度﹥99%。