[發明專利]球毛殼菌素A的新用途

無效

• 申請號: 201210185085.6
• 申請日: 2012-06-06
• 公開（公告）號: CN102754652A
• 公開（公告）日: 2012-10-31
• 發明（設計）人: 秦建春;張桂珍;潘洪玉;李想;張雅梅;莫華文;田野;程鴻
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: A01N43/90
• 分類號: A01N43/90;A01P3/00
• 代理公司: 長春吉大專利代理有限責任公司 22201
• 代理人: 邵銘康;朱世林

技術領域

本發明涉及一種新用途，具體為球毛殼菌素A在玉米大斑病、葡萄白腐病和番茄根霉菌果腐病生物防治中的新用途。

背景技術

植物內生菌能產生多種次生代謝產物，具有促進植物生長、提高宿主植物抗性等生理生態功能，內生菌普遍存在著抗菌活性，由于研究內生菌中抗菌活性物質具有十分重要的理論意義和應用前景，近年來這方面的進展十分迅速，尤其是從內生真菌中篩選到許多具有抗菌活性的化合物。

毛殼菌屬(Chaetomium)是一個大的真菌類群，主要腐生于植物殘體、紙張、土壤、動物糞便和富含纖維素的廢舊物品，以產豐富的降解纖維素的酶和具有生理活性的次生代謝產物而著稱，被認為具有潛在生物防治能力的類群，其生物防治機理主要包括：產生抗真菌的抗生素、酶類或其他代謝產物，誘導植物產生抗病性及對植物病原真菌重寄生作用等。

球毛殼菌素A不僅具有抗腫瘤活性，同時對腐霉菌、灰霉病菌、立枯絲核菌、鐮刀菌等植物病原真菌具有優異、廣譜的抑菌活性，所以球毛殼菌素A具備良好的發展為新型殺菌劑的開發前景。

發明內容

本發明的目的在于提供球毛殼菌素A的新用途，即在玉米大斑病、葡萄白腐病和番茄根霉菌果腐病生物防治中的新用途。

本發明的銀杏內生真菌菌株Chaetomium?globosum發酵液提取物分離的球毛殼菌素A，其結構式為：

銀杏內生真菌菌株Chaetomium?globosum發酵液提取物分離的球毛殼菌素A對玉米大斑病菌Exserohilum?turcicum、葡萄白腐病菌Coniothyrium?diplodiella、匍枝根霉Rhizopus?stolonifer具有拮抗活性。

銀杏內生真菌菌株Chaetomium?globosum發酵液提取物分離的球毛殼菌素A在玉米大斑病、葡萄白腐病、番茄根霉菌果腐病生物防治中的應用。

本發明采用的技術方案為：

球毛殼菌素A制備：

1)將球毛殼菌NO.05接種于真菌液體培養基中發酵7-8天，過濾，發酵液經乙酸乙酯萃取濃縮，收集的菌絲體用甲醇提取，而后再經乙酸乙酯萃取濃縮，發酵液所得濃縮物和菌絲體所得濃縮物合并，即為粗提物；

球毛殼菌NO.05保藏在吉林大學植物科學學院有害生物綜合防治實驗室，保藏編號為：NO.05，保藏日期為2010年10月2日。

2)發酵液乙酸乙酯提取浸膏通過硅膠柱層析、凝膠柱層析、反相柱層析分離，提取其中的化學成分，常壓柱層析采用濕法裝柱和硅膠拌樣上柱，根據薄層展開情況選擇洗脫溶劑系統，反相柱層析采用加壓裝置，凝膠柱層析選用SePhadexLH-20，采用甲醇以及甲醇一二氯甲烷洗脫，多次柱層析最后得到化合物球毛殼菌素A。

本發明的有益效果在于：銀杏內生真菌菌株Chaetomium?globosum發酵液提取物分離的球毛殼菌素A對玉米大斑病菌Exserohilum?turcicum、葡萄白腐病菌Coniothyrium?diplodiella、匍枝根霉Rhizopus?stolonifer具有拮抗活性，可在玉米大斑病、葡萄白腐病、番茄根霉菌果腐病生物防治中應用，并用于微生物源農藥的制備。

具體實施方式

硅膠柱制備：發酵液乙酸乙酯提取浸膏5.7g與柱層層析硅膠(100-200目)5.7g通過干法拌樣獲得上柱樣品，柱層層析硅膠(200-300目)100g，用二氯甲烷∶甲醇＝100∶0，二氯甲烷∶甲醇＝50∶1，二氯甲烷∶甲醇＝30∶1，二氯甲烷∶甲醇＝20∶1，二氯甲烷∶甲醇＝10∶1梯度洗脫，每份洗脫液為150ml，減壓蒸餾濃縮，薄板檢測，相似合并，得到A-F六個組分，其中C、D、E組分顯示較強的抗菌活性，所以在活性追蹤下進行連續兩次凝膠SePhadexLH-20柱層析，洗脫劑分別為二氯甲烷∶甲醇＝6∶4和甲醇，得到活性組分CZ-1，繼續硅膠柱層析，以環己烷∶丙酮＝10∶1洗脫得到活性組分CZ-1-C，然后繼續用反相RP-C₁₈柱層析純化，以水-甲醇(30％、45％、50％、55％)洗脫得到純化合物。經鑒定，該化合物為球毛殼菌素A。

球毛殼菌素A的抗菌新活性測定