[發(fā)明專利]蠶豆蛋白水解物中的乳酸菌促生長肽的制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210184875.2
• 申請日: 2012-06-07
• 公開（公告）號: CN103468770A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發(fā)明（設計）人: 王艷萍;肖萍
• 申請（專利權）人: 天津科技大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/20;C07K1/16;C07K14/29;C12Q1/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種蠶豆蛋白水解物中的促生長肽的分離純化方法，其組成包括：(1)蠶豆分離蛋白的制備：料液比為1∶12，提取pH8.0，超聲提取的功率660W，提取時間為20min，蠶豆分離蛋白中蛋白質含量為89.32％；(2)蠶豆蛋白水解物的制備：按底物濃度6％-8％加入蒸餾水中混勻，70-90℃下熱處理蠶豆分離蛋白10-15min，按照酶與底物比為84000-96000U/g加入堿性蛋白酶，通過加入2M氫氧化鈉來保持pH8.5不變，反應溫度為50-70℃，反應時間1h，水解度達到15-18％；(3)水解后的蠶豆蛋白水解物進行冷凍干燥，將干燥粉溶解在雙蒸水中，制備成不同濃度的水溶液用于測定蠶豆蛋白水解物對保加利亞乳桿菌等乳酸菌生長的促進作用；(4)蠶豆蛋白水解物采用葡聚糖凝膠Sephadex?G-25進行分離純化，收集流出液并積累濃縮，得到促生長活性最高的組分；(5)再通過高效液相色譜法分離純化，得到單一的促生長活性組分。利用基質輔助激光解吸飛行時間質譜MOLDI-TOF-MS進行分子量分析。

2.根據權利要求1所述的蠶豆蛋白水解物中的促生長肽的分離純化方法，其特征是：所述的葡聚糖凝膠層析分離條件為：葡聚糖凝膠層析柱：Sephadex?G-25；洗脫液：雙蒸水；流速：0.3-0.5mL/min；上樣量：1-2mL；紫外檢測：280nm。

3.根據權利要求1或2所述的蠶豆蛋白水解物中的促生長肽的分離純化方法，其特征是：所述高效液相色譜HPLC分離純化條件如下：色譜柱：4.6×250mm，C₁₈反相柱；流動相：含1-5％乙腈的水溶液；流速：0.8-1mL/min；梯度：等度洗脫；紫外檢測：280nm。根據洗脫峰的保留時間，手動收集樣品，然后進行濃縮。

4.根據權利1或2或3所述的蠶豆蛋白水解物中的促生長肽的分離純化方法，其特性是：所述的測定蠶豆蛋白水解物或分離純化后組分對乳酸菌(保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌、嗜酸乳桿菌等)生長的促進作用試驗方法如下：

a.所用菌種為實驗室保存的乳酸菌，所用培養(yǎng)基為MRS培養(yǎng)基和脫脂乳培養(yǎng)基。

b.將保加利亞乳桿菌等按3-5％接種量接種于含有不同濃度的蠶豆蛋白水解物的MRS液體培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)20h，在660nm下測量發(fā)酵液的OD值，檢測對乳酸菌生長的促進作用；

c.按照b所述方法對分離純化后的蠶豆肽組分依據≥2g/L的濃度添加到MRS液體培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)20h，取出發(fā)酵液，在660nm下測量OD值，檢測對保加利亞乳桿菌生長的促進作用。