[發明專利]一種提取純化蕓苔抗毒素的方法

無效

• 申請號: 201210184569.9
• 申請日: 2012-06-07
• 公開（公告）號: CN102675347A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發明（設計）人: 劉東鋒;楊成東
• 申請（專利權）人: 南京澤朗醫藥科技有限公司
• 主分類號: C07D513/04
• 分類號: C07D513/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

?本發明屬于植物有效成分提取分離領域，具體涉及一種提取純化蕓苔抗毒素的方法。

背景技術

蕓苔抗毒素（Brassilexine）為白色微晶，是一種吲哚生物堿，分子式為C₉H₆N₂S，分子量為174.23，來源于十字花科(Cruciferae)芥菜Brassica?juncea?L.的葉。藥理研究表明，蕓苔抗毒素具抗腫瘤作用，抑制人癌細胞生長，其LD50為8μg/mL。在濃度為20μg/mL時，其具細胞毒活性，能100%抑制KB細胞。此外蕓苔抗毒素在體外還有抗真菌活性。

芥菜，（學名：Brassica?juncea?L），是蕓苔屬一年生或二年生草本。又名雪里蕻。具有宣肺豁痰，溫中利氣的功效，主治寒飲內盛，咳嗽痰滯，胸隔滿悶。耳目失聰、牙齦腫爛、寒腹痛、便秘等病癥。性溫味辛。入肺、胃、腎經。芥菜含有維生素A、B族維生素、維C和維D等。芥菜含有大量的抗壞血酸，是活性很強的還原物質，參與機體重要的氧化還原過程，能增加大腦中氧含量，激發大腦對氧的利用，有提神醒腦，解除疲勞的作用。

目前對芥菜化學成分研究較少，尚未見蕓苔抗毒素的相關提取研究報道。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種提取純化蕓苔抗毒素的方法，該方法工藝簡單、污染小、得率高、產品純度高。

為了解決上述技術問題，本發明的技術方案如下：

以芥菜葉為原料，投入萃取釜中，采用超臨界CO₂萃取2-4小時，收集萃取物，用氨水調節pH至9，加入二氯甲烷萃取，二氯甲烷萃取液加入氧化鋁中壓柱，水洗至中性，再用二氯甲烷-甲醇混合溶液洗脫，TLC跟蹤檢測，收集高濃度流分，回收試劑，干燥得蕓苔抗毒素產品。

所述超臨界CO₂萃取條件為：萃取溫度為35-55℃，萃取壓力為20-28MPa，分離釜Ⅰ溫度為25-45℃，壓力為10-18MPa，分離釜Ⅱ溫度為20-35℃，壓力為4-8MPa。

所述氧化鋁為中性氧化鋁，目數為200-400目。

所述二氯甲烷-甲醇梯度洗脫順序為：依次按體積比二氯甲烷-甲醇20:1、10:1、5:1、5:2進行洗脫。

本發明的有益效果在于：采用超臨界CO₂萃取，具有操作溫度低，選擇性好，操作條件較溫和，制取的產品純度高，萃取無殘留，是一種高效環保的萃取方法；采用中壓氧化鋁柱分離，可進行大量制備；本發明工藝穩定，可用于工業化生產。

下面將結合具體實施方式進一步說明本發明，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。

具體實施方式：

實施例1：

將芥菜葉粉碎，過20目篩，稱取10kg加入萃取釜中，開啟機器，調節參數：萃取溫度為35℃，萃取壓力為28MPa，分離釜Ⅰ溫度為25℃，壓力為18MPa，分離釜Ⅱ溫度為20℃，壓力為8MPa，以40L/h的流速通入CO₂萃取2小時，解析萃取物，用氨水調節pH至9，再加入二氯甲烷萃取多次，收集合并二氯甲烷萃取液，減壓濃縮后加入氧化鋁中壓柱（400目的中性氧化鋁，柱徑高比為1:5），依次按體積比二氯甲烷-甲醇20:1、10:1、5:1、5:2進行洗脫，TLC跟蹤檢測，收集高濃度流分，回收試劑，干燥得蕓苔抗毒素產品408mg，含量為95.3%。

實施例2：

將芥菜葉粉碎，過20目篩，稱取10kg加入萃取釜中，開啟機器，調節參數：萃取溫度為55℃，萃取壓力為20MPa，分離釜Ⅰ溫度為45℃，壓力為10MPa，分離釜Ⅱ溫度為35℃，壓力為8MPa，以40L/h的流速通入CO₂萃取4小時，解析萃取物，用氨水調節pH至9，再加入二氯甲烷萃取多次，收集合并二氯甲烷萃取液，減壓濃縮后加入氧化鋁中壓柱（200目的中性氧化鋁，柱徑高比為1:7），依次按體積比二氯甲烷-甲醇20:1、10:1、5:1、5:2進行洗脫，TLC跟蹤檢測，收集高濃度流分，回收試劑，干燥得蕓苔抗毒素產品375mg，含量為89.3%。

實施例3：