[發(fā)明專利]房顫易感基因無創(chuàng)檢測試劑盒

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210184474.7
• 申請日: 2012-06-06
• 公開（公告）號: CN103468784A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發(fā)明（設計）人: 鄭俊斌
• 申請（專利權）人: 解碼(上海)生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本專利屬于分子生物學領域，涉及醫(yī)學和生物技術，具體涉及一種房顫易感基因無創(chuàng)檢測試劑盒，通過檢測房顫易感性密切相關的基因，從基因層面評估房顫遺傳易感性的風險級別，為房顫的預防提供建議指導。

背景技術

心房顫動（atrial?fibrillation，AF，簡稱房顫）是一種以心房快速而不規(guī)則激動為特征的心律失常，在臨床上也是持續(xù)性心律失常中最為常見的一種，它不但使患者頻繁心悸，而且心房的不規(guī)則顫動易產生左心房血栓，導致多種并發(fā)癥，重者危及生命。

房顫的患病率隨著年齡增長而顯著增加。我國目前房顫患者約有1000萬人，成人房顫的發(fā)病率為0.77％，80歲以上人群中上升至7.5%，與國外調查結果類似，上海和山東威海等地區(qū)的房顫流行病學調查也顯示了相似的患病趨勢。

單核苷酸多態(tài)性（SNP）是人類基因組DNA序列變異的主要形式，是決定人類疾病易感性和藥物反應性個體差異的重要因素。現(xiàn)有的研究已經明確了一些房顫家系的致病基因和位點以及一些基因多態(tài)性位點與房顫的相關性。

血管緊張素原（angiotensinogen，AGT）基因由5個外顯子和4個內含子構成，第2外顯子上第704位核苷酸T-C突變導致第235位氨基酸由甲硫氨酸變成蘇氨酸。這個突變可引起血漿中AGT水平輕度增加，促使血管緊張素Ang?I和Ang?II增加，進而改變血管收縮、水鹽代謝和醛固酮合成，導致心房纖維化及傳導不均一性等，這對房顫的潛在診斷和預測疾病的發(fā)生、發(fā)展具有重要的應用價值。

G蛋白是由α、β、γ三個亞基組成的異源三聚體，介導G蛋白偶聯(lián)受體激動后的細胞內信號轉導，參與細胞多種生命過程。其中編碼G蛋白β3亞基的GNB3基因第10個外顯子存在一個多態(tài)位點C825T，T等位基因的出現(xiàn)導致β3基因第9外顯子在轉錄時缺失123個堿基，由此產生了活性更強的GNB3剪輯變異體，導致下游的信號活動增強，這種作用在中國人群中增加了房顫發(fā)生的風險，顯示了GNB3?C825T是家族性房顫的一個遺傳危險因素。

轉化生長因子β1（Transforming?growth?factor?beta1,?TGF-β1）在心房纖維化的發(fā)生和調控方面有非常重要的作用，該基因的T869C位點多態(tài)性與房顫的發(fā)生有較高相關性。這種基因多態(tài)性能引起編碼區(qū)第10密碼子亮氨酸（Leu）替換為脯氨酸（Pro），影響蛋白的疏水性，導致TGF-β1蛋白輸出改變，引起心房纖維化，為房顫的發(fā)生提供病理基礎。張忠棟等2009年對103例房顫患者和109例對照者的研究顯示，T869C位點SNP與中國華南地區(qū)漢族人群房顫的發(fā)生有明顯的相關性，T等位基因是房顫發(fā)生的保護基因，C等位基因是房顫的易患基因。??????

單核苷酸多態(tài)性已成為人類群體遺傳學的生物學標志，因此，建立簡單、快速的房顫易感基因無創(chuàng)檢測方法，能夠檢測出與房顫發(fā)生相關的基因單核苷酸位點基因型，及時篩查出易患房顫的高危人群，及早進行預防，對降低房顫發(fā)病率、減輕社會經濟負擔有著重要意義。

發(fā)明內容

基于AGT基因上M235T?(rs699)、GNB3基因上C825T(rs5443)、TGF-Β1基因上T869C?(rs1982073)的3個單核苷酸多態(tài)性位點基因型可用來評估房顫發(fā)病風險級別，本發(fā)明提供一種房顫基因無創(chuàng)檢測試劑盒。

該試劑盒包括：

檢測AGT基因上M235T?(rs699)、GNB3基因上C825T(rs5443)、TGF-Β1基因上T869C?(rs1982073)的3個單核苷酸多態(tài)性位點基因型的特異性引物對及DNA測序引物；

PCR反應組件（包括Taq酶、dNTP混合液、反應緩沖液、ddH2O等）；

PCR產物純化組件（包括SAP酶、ExoI酶、ddH2O等）；

DNA測序反應組件（包括BigDye?mix，EDTA溶液、100%乙醇溶液、70%乙醇溶液、HIDI溶液、ddH2O等）。

本發(fā)明試劑盒的組分和含量包括：

PCR反應體系：10×PCR反應緩沖液?2.5ul；25mM?dNTP混合液0.2ul；5U/ul?Taq?DNA聚合酶0.125ul；20uM特異性引物對（每條引物各0.25ul）；ddH2O?19.175ul；

PCR產物純化體系：1U/ul?SAP酶?0.75ul；10U/ul?ExoI酶0.375ul；ddH2O?3.875ul；