[發(fā)明專利]糖代謝能力基因無創(chuàng)檢測試劑盒

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210184473.2
• 申請日: 2012-06-06
• 公開（公告）號: CN103468783A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發(fā)明（設計）人: 鄭俊斌
• 申請（專利權）人: 解碼(上海)生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發(fā)明屬于分子生物學領域，涉及醫(yī)學和生物技術，具體涉及一種糖代謝能力的基因檢測試劑盒，根據(jù)檢測結果從基因層面評估人群糖代謝能力發(fā)生的風險級別，并且指導糖代謝能力高危人群提早預防和治療。?

背景技術

糖是一類化學本質(zhì)為多羥醛或多羥酮及其衍生物的有機化合物。在人體內(nèi)糖的主要形式是葡萄糖(glucose，Glc)及糖原(glycogen，Gn)。葡萄糖是糖在血液中的運輸形式，在機體糖代謝中占據(jù)主要地位；糖原是葡萄糖的多聚體，包括肝糖原、肌糖原和腎糖原等，是糖在體內(nèi)的儲存形式。葡萄糖與糖原都能在體內(nèi)氧化提供能量。食物中的糖是機體中糖的主要來源，被人體攝入經(jīng)消化成單糖吸收后，經(jīng)血液運輸?shù)礁鹘M織細胞進行合成代謝和分解代謝。機體內(nèi)糖的代謝途徑主要有葡萄糖的無氧酵解、有氧氧化、磷酸戊糖途徑、糖原合成與糖原分解、糖異生以及其他己糖代謝等。

TNF-α編碼的蛋白具有促進細胞生長、誘導細胞分化和凋亡的作用，對免疫反應、機體代謝、炎癥反應和糖代謝等均具有重要的調(diào)節(jié)和介導作用。2007年，周彬對78例妊娠期糖代謝異常(Gestational?diabetes?mellitus,GDM)的孕婦和78例同年齡健康孕婦進行研究，用多聚合酶鏈式反應-限制性片段長度多態(tài)性分析(PCR-RFLP)的方法檢測了TNF-α啟動子基因多態(tài)性與血漿TNF-α含量及妊娠期糖代謝異常(Gestational?diabetes?mellitus,GDM)的關系，同時用ELISA法測定血漿TNF-α的含量。試圖通過基因頻率、血漿TNF-α水平及胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)等指標來闡明GDM患者的TNF-α啟動子基因多態(tài)性及胰島素抵抗狀況。結果發(fā)現(xiàn)，TNF-α啟動子-308“A”等位基因可能為我國山東省漢族人GDM的易感基因。TNF-α啟動子-308“GA+AA”基因型可能與血漿中TNF-α含量有關，并對加重胰島素抵抗有一定的作用。

維生素D受體（VDR）基因編碼的蛋白與維生素D結合維持正常的胰島素分泌和糖耐量。維生素D受體結構變化，導致不能有效的結合維生素D，從而引起胰島素分泌受損，糖代謝能力下降。Ban等的研究發(fā)現(xiàn)VDR?FokI多態(tài)性與日本人胰島素依賴型糖尿病(insulin?dependent?diabetes?mellitus?,?IDDM)的GAD65抗體陽性有關。IL6編碼的蛋白是機體免疫網(wǎng)絡中最重要的細胞因子，在免疫反應、炎癥反應和糖代謝等起重要作用。當IL6基因G-174C位點為GG?基因型時，IL6基因表達的蛋白明顯增加，激活腦、肝、血管內(nèi)皮、脂肪等組織的急性相反應，并導致胰島素抵抗，糖代謝能力下降。因此，VDR基因上和IL6基因上的單核苷酸多態(tài)性位點基因型可以作為糖代謝能力相關疾病的獨立危險因素進行基因檢測。

因此，建立簡單、快速的糖代謝能力易感基因無創(chuàng)檢測方法，能夠檢測出糖代謝相關疾病發(fā)生相關的基因單核苷酸位點基因型，及時篩查出易患相關疾病的高危人群，有針對性的進行指導，對于保障人群安全健康、降低糖代謝相關疾病的發(fā)生具有非常重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

基于TNF-α基因上G-308A、VDR基因上FokI、IL6基因上G-174C的3個單核苷酸多態(tài)性位點基因型可用來評估人群糖代謝能力相關疾病的發(fā)病風險級別，本發(fā)明提供一種糖代謝能力基因無創(chuàng)檢測試劑盒。

該試劑盒包括：

檢測TNF-α基因上G-308A、VDR基因上FokI、IL6基因上G-174C的3個單核苷酸多態(tài)性位點基因型的特異性引物對及DNA測序引物；

PCR反應組件（包括Taq酶、dNTP混合液、反應緩沖液、ddH2O等）；

PCR產(chǎn)物純化組件（包括SAP酶、ExoI酶、ddH2O等）；

DNA測序反應組件（包括BigDye?mix，EDTA溶液、100%乙醇溶液、70%乙醇溶液、HIDI溶液、ddH2O等）。

本發(fā)明試劑盒的組分和含量包括：

PCR反應體系：10×PCR反應緩沖液?2.5ul；25mM?dNTP混合液0.2ul；5U/ul?Taq?DNA聚合酶0.125ul；20uM特異性引物對（每條引物各0.25ul）；ddH2O?19.175ul；

PCR產(chǎn)物純化體系：1U/ul?SAP酶?0.75ul；10U/ul?ExoI酶0.375ul；ddH2O?3.875ul；