[發明專利]冠心病易感基因無創檢測試劑盒

無效

• 申請號: 201210184470.9
• 申請日: 2012-06-06
• 公開（公告）號: CN103468781A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發明（設計）人: 鄭俊斌
• 申請（專利權）人: 解碼(上海)生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種篩查冠心病高危人群的基因無創檢測試劑盒，其特征在于：檢測NOS3基因上G894T?(rs1799983)、MTHFR基因上C677T(rs1801133)、LPL基因上HindIII?(rs320)的3個單核苷酸多態性位點基因型的特異性引物與DNA測序引物、Taq酶、dNTP混合液、反應緩沖液、SAP酶、ExoI酶、BigDye?mix、EDTA溶液、70%乙醇溶液、100%乙醇溶液、HIDI溶液、ddH₂O等。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述的特異性引物對是指針對NOS3基因上G894T?(rs1799983)、MTHFR基因上C677T(rs1801133)、LPL基因上HindIII?(rs320)的3個單核苷酸多態性位點，能特異性擴增出包含這3個SNPs位點的DNA片段的引物對。

3.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述的DNA測序引物是針對NOS3基因上G894T?(rs1799983)、MTHFR基因上C677T(rs1801133)、LPL基因上HindIII?(rs320)的3個單核苷酸多態性位點而設計，能通過DNA測序技術特異性檢測出上述3個SNPs位點基因型的DNA測序引物。

4.根據權利要求1所示的試劑盒，其特征在于，所含的3對特異性引物序列如下：

（1）NOS3（G894T）正向引物：5'ATGAGGAAACCAGTGGGAGA3'

NOS3（G894T）反向引物：5'CCTCACCTCCAGGATGTTGT3'

（2）MTHFR（C677T）正向引物：5'AGGGAGGCTTCAACTACGC3'

MTHFR（C677T）反向引物：5'GCGGTTGAGGGTGTAGAAGT3'

（3）LPL?(HindIII)?正向引物：5'TCATTTGGCACTGTTTCTTGT3'

?????LPL?(HindIII)?反向引物：5'CTTATGTTACTGGGCTTTCACC3'。

5.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所含的3條DNA測序引物序列如下：

（1）NOS3（G894T）測序引物：5'ATGAGGAAACCAGTGGGAGA3'

（2）MTHFR（C677T）測序引物：5'AGGGAGGCTTCAACTACGC3'

（3）LPL?(HindIII)?測序引物：5'?TCATTTGGCACTGTTTCTTGT3'。

6.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于試劑盒的組分和含量包括：

（1）PCR反應體系：10×PCR反應緩沖液2.5ul，25mM?dNTP混合液0.2ul，5U／ul?Taq?DNA聚合酶?0.125ul，20uM特異性引物對，每條引物各0.25ul，ddH₂O?19.175ul；

（2）PCR產物純化體系：1?U／ul?SAP酶0.75ul，10?U／ul?ExoI酶0.375ul，ddH₂O?3.875ul；

（3）測序反應體系：25%?BigDye?mix1ul，3.2uM?DNA測序引物1ul，125mM?EDTA溶液1ul，100%乙醇溶液15ul，70%乙醇溶液30ul，HIDI溶液8ul，ddH₂O?2ul。

7.本試劑盒供一人份檢測應用，試劑盒的保存溫度為-20℃。