[發明專利]一種誘導腫瘤干細胞向淋巴管內皮細胞分化的無血清培養基及方法

有效

• 申請號: 201210184016.3
• 申請日: 2012-06-05
• 公開（公告）號: CN102719393A
• 公開（公告）日: 2012-10-10
• 發明（設計）人: 張雁;賀姮;張海霞
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 李柏林

技術領域

本發明屬于腫瘤學和干細胞學研究領域，涉及一種誘導腫瘤干細胞向淋巴管內皮細胞分化的無血清培養基及方法。

背景技術

淋巴轉移是腫瘤轉移的重要途徑之一，也是腫瘤分期的重要內容和預后的重要因素，大量臨床證據表明：頭頸部鱗狀上皮細胞癌最終通過多循淋巴通道轉移，但迄今為止，關于瘤細胞如何進入淋巴管的確切機制尚不清楚。

目前有幾種分子可以作為淋巴內皮細胞的標記物：①血管內皮生長因子受體3(VEGFR3)，也稱作fins樣酪氨酸激酶4(flt4)；②淋巴內皮透明質酸受體一1(LYVE-1)，與CD44同源，除肝細胞表達外，被作為正常或腫瘤組織淋巴管內皮特異性標記物；③podoplanin除表達于淋巴管內皮及良、惡性血管源性腫瘤細胞，其他一些非上皮細胞也有表達；④Prox-1是同源異型盒轉錄因子基因產物，它與胚胎淋巴管芽的生長、延伸及淋巴管內皮細胞的表型改變密切相關。目前多單獨或者聯合應用VEGFR-3、LYVE-1標記淋巴管。

早期研究認為，腫瘤組織內無淋巴管存在，惡性腫瘤主要是通過腫瘤邊緣正常組織內的毛細淋巴管進入淋巴系統，從而造成淋巴轉移。后期的研究逐步證明了在腫瘤的內部是有淋巴管的，尤其是早期即發生淋巴轉移的腫瘤。頭頸部鱗狀上皮細胞癌是容易發生早期淋巴結轉移的典型疾病，80%的患者在確診時已經發生了轉移。因此頭頸部鱗狀上皮細胞癌是研究淋巴轉移的最佳模型。

惡性腫瘤及其轉移瘤難以根治的原因在于腫瘤細胞群體的生物學異質性。異質性是指腫瘤中的不同細胞亞群，在化療的敏感性、生長速度、對細胞因子刺激的反應、轉移能力等方面存在的差異。近年的研究結果表明，腫瘤組織存在腫瘤干細胞?(Cancer?Stem?Cells,?CSC)。CSC是具有自我更新，自我復制能力的細胞，CSC對化療藥物和放射線治療具有很強的耐受性，并且可以分化出不同表型的腫瘤細胞和間質細胞，重建腫瘤組織的異質性。多數頭頸部SCC患者在發病的早期就有淋巴結轉移，推測這種腫瘤組織中的毛細淋巴管應該不是來源于患者本身的淋巴管，因為在發病早期宿主淋巴管尚未遷移至腫瘤。因此，腫瘤組織中的毛細淋巴管很有可能源自具有分化能力的CSC。CSC在微環境的協同下分化為毛細淋巴管，為腫瘤的早期淋巴轉移創造條件。

為了進行CSC向淋巴管分化實驗，本發明提供了一種高效的、模擬體內環境的分化誘導方法和無血清分化誘導培養液，為深入研究腫瘤的淋巴轉移提供有力的支持。

發明內容

本發明的目的在于提供一種誘導腫瘤干細胞向淋巴管內皮細胞分化的無血清培養基。

本發明的另一目的在于提供一種誘導腫瘤干細胞向淋巴管內皮細胞分化的方法。

本發明還提供了誘導腫瘤干細胞向淋巴管內皮細胞分化的無血清培養基的制備方法。

本發明所采用的解決方案為：

一種誘導腫瘤干細胞向淋巴管內皮細胞分化的無血清培養基，所述無血清培養基含有基礎培養基、添加物，所述添加物含有的組分和用量為：

轉鐵蛋白?3.6～5.8mg/L、

β-巰基乙醇?0.52～0.88mg/L、

胰島素?1.6～12.8mg/L、

牛血清白蛋白?450～600mg/L、

肝素鈉?50～200μg/L、

血管內皮細胞生長因子C?20～100μg/L、

谷丙氨酸二肽400～460mg/L、

L-抗壞血酸-2-磷酸三鈉鹽9.5～12.5mg/L、

氨基乙醇0.48～1.1mg/L、

亞硒酸鈉0.0017～0.002mg/L、

油酸88～126mg/L，

所述基礎培養基含有的組分和用量為：

胸苷0.315～0.385mg/L、

葡萄糖?3000～3300mg/L、

次黃嘌呤1.88～2.2mg/L、

酚紅鈉?8.18～8.98mg/L、

所述基礎培養基還含有如下組分和用量中的至少一種氨基酸：