[發明專利]一種藍鰓太陽魚遺傳多樣性分析方法

無效

• 申請號: 201210183859.1
• 申請日: 2012-06-06
• 公開（公告）號: CN102676686A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發明（設計）人: 徐海華;王榮泉;宣云峰;阮瑞霞
• 申請（專利權）人: 吳江市水產養殖有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司 32103
• 代理人: 孫仿衛;李艷

技術領域

本發明涉及一種藍鰓太陽魚遺傳多樣性分析方法。

背景技術

藍鰓太陽魚隸屬鱸形目太陽魚科，原產于北美，是一種肉味鮮美、易起捕、可觀賞、適溫較廣的名貴小型淡水魚類。六十年代除由北美移入日本，現已在日本內陸流域的許多湖泊形成了藍鰓太陽魚的自然種群。1987年，中國水產學會從日本引進太陽魚并于1999年人工繁殖成功，現已作為優質魚類進行推廣。藍鰓太陽魚是多次產卵魚類，多年的累代繁育與養殖，可能導致養殖太陽魚的遺傳多樣性降低。因此，很有必要對中國現有太陽魚的種群結構、遺傳多樣性現狀進行分析。

發明內容

為了解決上述問題，本發明的目的在于提供一種藍鰓太陽魚遺傳多樣性分析方法來分析不同地域群體內繁殖所得的子代群體和群體間繁殖所得子一代群體的遺傳多樣性，以適應養殖業發展的要求，開展藍鰓太陽魚育種工作。

為了達到以上目的，本發明采用的技術方案是：一種藍鰓太陽魚遺傳多樣性分析方法，它包括以下步驟：

（1）從尾靜脈采血，提取基因組DNA；

（2）測定DNA完整性和濃度；

（3）利用隨機引物進行PCR反應；

（4）擴增產物電泳分離；

（5）根據遷移率計算各群體遺傳變異的各個參數。

進一步地，步驟1中，采集的血樣使用蛋白酶K消化12小時以上。

更進一步地，步驟1中，用酚氯法提取基因組DNA。

進一步地，步驟2中，提取的DNA樣本用瓊脂糖凝膠電泳進行電泳，電泳完成后通過紫外分光光度計檢驗DNA完整性和濃度。

更進一步地，步驟4中，擴增產物在2±0.5％的瓊脂糖進行電泳，分離不同分子量大小的DNA片段。

進一步地，步驟5中，根據遷移率計算各群體遺傳變異的各個參數，其實現過程如下：

根據電泳結果，遷移率相同的都視為同一位點，有帶的記為1，無帶的記為0，將電泳圖轉化為0、1矩陣，根據RAPD擴增結果所統計的數據，計算各群體遺傳變異的各個參數，

多態位點比例P的計算公式：???????????????????????????????????????????????，

群體內和群體間的遺傳相似系數的計算公式：，

其中，N_xy是個體(地理群體)x、y的共有條帶數；N_x和N_y分別是個體(地理群體)x和y的擴增條帶數，平均遺傳相似系數通過群體內和群體間各個體間的相似系數平均而求得。

群體內和群體間的遺傳距離計算公式：D=1-S，

Nei基因多樣性指數?(He)^[12]：，

其中，p_i為第i個位點在群體中出現的頻率，n為所測位點總數。

通過采用以上技術方案，本發明一種藍鰓太陽魚遺傳多樣性分析方法，實現藍鰓太陽魚遺傳多樣性分析，采用本技術分析藍鰓太陽魚遺傳多樣性，速度快、準確率高、效果好。

具體實施方式

下面對本發明的較佳實施例進行詳細闡述，以使本發明的優點和特征能更易于被本領域技術人員理解，從而對本發明的保護范圍做出更為清楚明確的界定。

本實施例中的一種藍鰓太陽魚遺傳多樣性分析方法，包括以下步驟：

（1）從尾靜脈采血，提取基因組DNA；

（2）測定DNA完整性和濃度；

（3）利用隨機引物進行PCR反應；

（4）擴增產物電泳分離；

（5）根據遷移率計算各群體遺傳變異的各個參數。

各步驟具體實施方式如下：

1、從尾靜脈采血，提取基因組DNA：