[發明專利]抑制PDCD4基因表達的siRNA及其應用

有效

• 申請號: 201210183751.2
• 申請日: 2012-06-05
• 公開（公告）號: CN102719435A
• 公開（公告）日: 2012-10-10
• 發明（設計）人: 費嘉;谷景義;朱雪嬌;駱小闖;李育敏
• 申請（專利權）人: 暨南大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12Q1/02;G01N21/31
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 裘暉;陳燕嫻

技術領域

本發明涉及分子生物學領域，特別涉及一種抑制PDCD4基因表達的siRNA及其在研究PDCD4基因功能中的應用。

背景技術

程序性細胞死亡因子4（Programmed?cell?death4,PDCD4）是近年來發現的一種新的抑癌基因，研究報道其在肺癌、結直腸癌、乳腺癌、胃癌、胰腺癌、卵巢癌、神經膠質瘤和肝細胞癌等多種惡性腫瘤細胞中表達缺失或低表達。Chen等（Chen?Y，Knosel?T,Kristiansen?G.J?Pathol,2003,(5):640-646.）通過研究124例不同亞型的原發性肺癌樣本，結果顯示，83%的腫瘤樣本中PDCD4蛋白表達缺失，相對于肺部正常組織中PDCD4mRNA的表達，肺癌組織中PDCD4mRNA的表達水平比正常肺部組織中顯著降低。Afonja等（Afonja?O,Juste?D,Das?S,et?al.Oncogene,2004,23:8135.）在對乳腺癌細胞系的研究中發現，通過轉染PDCD4到T-47D和MDA-MB-231乳腺癌細胞系，可以誘導細胞凋亡的發生。Zhang等（Zhang?H,Ozaki?I,Mizuta?T,et?al.Oncogene,2006,25(45):6101-6112.）發現PDCD4也可以誘導肝癌細胞系Huh7的凋亡。PDCD4的表達產物可調節細胞的程序性死亡，也可通過抑制凋亡相關基因的轉錄或翻譯從而抑制腫瘤的生成或腫瘤細胞的生長。

腫瘤細胞中PDCD4的表達水平與藥物對細胞的敏感性之間存在一定的關系。通過轉染反義PDCD4可以明顯減弱腎癌細胞系UO-31對藥物葛爾德霉素的敏感性，說明細胞中下調PDCD4的表達會減弱藥物的細胞毒性（Bohm,M.,Sawicka,K.,Siebrasse,J.P.,Brehmer-Fastnacht,A.,Peters,R.,&?Klempnauer,K.H.(2003).Oncogene,22(31),4905-4910.）。此外，通過轉染全長PDCD4cDNA的質粒到人胃腺癌細胞系BGC-823中，增強PDCD4蛋白在細胞中的表達，發現其可相應的增強BGC-823細胞對藥物羥基喜樹堿（HCPT）的敏感性（王漢卿，孫震曉。世界華人消化雜志，2009，（7）：647-651.）。Jansen等（Jansen,A.P.,Camalier,C.E.,Stark,C.,&?Colburn,N.H.Mol?Cancer?Ther,2004,3(2),103-110.）。研究發現PDCD4的表達可提高腫瘤細胞對化療藥物的敏感性，腫瘤細胞中PDCD4的表達水平與細胞對抗腫瘤藥物的敏感性正相關，上調PDCD4的表達會增加細胞對某些化療藥物的敏感性，反之，下調PDCD4的表達則會引起某些藥物對細胞毒性的減弱。

然而PDCD4在白血病中的功能研究較少，最近的研究發現，在急性髓性白血病（Acute?myelogenous?leukemia,AML）中，PDCD4的表達可促進維A酸誘導的粒細胞分化（Ozpolat?B,Akar?U,Steiner?M,et?al.Mol?Cancer?Res,2007,5:95.）。近期的報道表明，在白血病中PDCD4基因直接被miRNA-21調控，抑制miRNA-21可以導致PDCD4的表達水平顯著升高，并展示出顯著的抗白血病作用（①Yumin?Li,Xujiao?Zhu,et?al.Cancer?Science.2010,101(4):948-954;②Haiyan?Hu,Yumin?Li,Jingyi?Gu,et?al.Leuk?Lymphoma.2010,51(4):694-701;③Jingyi?Gu,Xujiao?Zhu,Yumin?Li,et?al.Med?Oncol.2011,28(1):211-218.），這提示抑癌基因PDCD4在白血病中也有重要作用。

近年RNA干擾技術迅速發展，不僅廣泛用于腫瘤基因治療，而且也是研究基因功能的有用工具。

發明內容

本發明的首要目的在于提供一種抑制PDCD4基因表達的siRNA。

本發明的另一目的在于提供上述抑制PDCD4基因表達的siRNA的應用。

本發明的目的通過下述技術方案實現：

一種抑制PDCD4基因表達的siRNA，其序列為：

正義鏈：5'-GGAGCGGUUUGUAGAAGAA-3'，

反義鏈：5'-UUCUUCUACAAACCGCUCC-3'；