[發(fā)明專利]人體脂肪干細(xì)胞快速提取方法及其專用人脂肪組織消化劑

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210181162.0
• 申請(qǐng)日: 2012-06-04
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102719396A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-10-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 焦陽(yáng)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇瑞思坦生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/0775
• 分類號(hào): C12N5/0775;C12N5/077
• 代理公司: 北京商專永信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11400
• 代理人: 高之波;鄔玥

1.一種人體脂肪干細(xì)胞快速提取方法，包括如下步驟：

人脂肪組織處理：將人脂肪組織塊加入離心管中，再加入等量的生理鹽水而后使用組織勻漿器處理成液狀的脂肪，再將已成為液狀的脂肪加入離心管中；

將液狀的脂肪離心：使用離心機(jī)分離離心管中的液狀脂肪使之分為三層，上層即油層、中間層即脂肪層、底層即沉積層；

脂肪層中人體脂肪干細(xì)胞提取：移取中間層脂肪至離心管中，加入與脂肪層相等體積的人脂肪組織消化劑混勻，該消化劑包含膠原酶IV型、胰蛋白酶-EDTA復(fù)合體、α1抗胰蛋白酶、二甲基亞砜，然后置于恒溫振蕩器中振蕩，接著離心分離后去浮游脂肪取上層液體；而后再向取出的上層液體中加入Dulbecco’s磷酸鹽緩沖液然后離心，棄去離心后的上清液取下層沉積細(xì)胞，再使用Dulbecco’s磷酸鹽緩沖液重復(fù)離心洗滌2次，下層沉積細(xì)胞即為人體脂肪干細(xì)胞；

沉積層中人脂肪干細(xì)胞提取：在留有沉積層細(xì)胞的離心管中加入等體積的人脂肪組織消化劑混勻，該消化劑包含膠原酶IV型、胰蛋白酶-EDTA復(fù)合體、α1抗胰蛋白酶、二甲基亞砜，然后置于恒溫振蕩器中振蕩后離心機(jī)離心,其后吸除上層液體，下層沉積細(xì)胞即為人脂肪干細(xì)胞。

2.人體脂肪干細(xì)胞快速提取中使用的人脂肪組織消化劑，其特征在于：包含膠原酶IV型、胰蛋白酶-EDTA復(fù)合體、α1抗胰蛋白酶、二甲基亞砜，所述膠原酶IV型濃度為0.15~2.5mg/mL，所述胰蛋白酶-EDTA復(fù)合體濃度為0.5~5mg/mL，所述α1抗胰蛋白酶濃度為0.1~1.5mg/mL，所述二甲基亞砜濃度為5~100μl/mL。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的人脂肪組織消化劑，其特征在于：膠原酶IV型的最優(yōu)濃度為0.75mg/mL，胰蛋白酶-EDTA復(fù)合體最優(yōu)濃度為2.5mg/mL，α1抗胰蛋白酶最優(yōu)濃度為0.5mg/mL，二甲基亞砜最優(yōu)濃度為30μl/mL。

4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的人脂肪組織消化劑，其特征在于：制備所述的一種人脂肪組織消化劑時(shí)使用Dulbecco’s磷酸鹽緩沖液作為溶劑。