[發明專利]一種提高泰樂菌素組分A轉化率的方法

有效

• 申請號: 201210180813.4
• 申請日: 2012-06-05
• 公開（公告）號: CN102703549A
• 公開（公告）日: 2012-10-03
• 發明（設計）人: 王義;任勇;劉建成;王文超;徐淑芬
• 申請（專利權）人: 寧夏泰瑞制藥股份有限公司
• 主分類號: C12P19/62
• 分類號: C12P19/62;C12R1/54
• 代理公司: 寧夏專利服務中心 64100
• 代理人: 徐淑芬

技術領域

本發明屬于生物發酵工程技術領域，特別是涉及一種提高泰樂菌素A轉化率的方法。

背景技術

泰樂菌素是由弗氏鏈霉菌經發酵提取而得到的一種大環內酯類抗生素，有泰樂菌素堿、磷酸鹽和酒石酸鹽三種形態。泰樂菌素是一種禽、畜專用的高效、無殘留抗菌促生劑。對雞敗血癥、豬流行性肺炎等疾病有獨特的療效，且對禽、畜的生長具有明顯的促進作用。泰樂菌素作為動物專用抗生素，避免了人畜共用抗生素易產生交叉耐藥性的問題，用于防治豬、禽支原體病。

在泰樂菌素發酵生產過程中影響泰樂菌素A生物轉化的關鍵因素是泰樂菌素生物合成的最后一步限速反應：

，在該過程中，大菌素甲基轉移酶屬于胞內酶，其活性易受到發酵產物及產物類似物的反饋抑制。泰樂菌素發酵周期中，發酵前期大菌素甲基轉移酶活力較強，酶反應抑制劑沒有或較少(泰樂菌素及其他泰樂菌素類似物等)，所以絕大部分大菌素C能夠迅速合成泰樂菌素A，菌體以產組分A為主，隨著發酵時間的延長，酶反應抑制劑逐漸增多，酶活力降低，部分大菌素C不能被甲基化，此時菌體以產組分C為主。目前，工業生產泰樂菌素的發酵工藝控制仍然是針對發酵過程中的PH值、溫度、罐壓等等，其發酵水平為10000～12000u/ml，泰樂菌素A組分為80～85％。組分轉化過程中存在一定的困難，當前針對泰樂菌素轉化困難的相關文獻或專利至今尚未見報道。

發明內容

本發明的目的就在于克服上述現有技術的缺陷，提供一種有效提高泰樂菌素A組分轉化率的方法。

為實現本發明目的所采取的技術方案為：

一種提高泰樂菌素A轉化率的方法，該方法是以弗氏鏈霉菌為產生菌，經一級種子罐發酵培養、二級種子罐發酵培養和發酵罐發酵培養發酵生產泰樂菌素，其特征是：在發酵罐發酵培養結束對數生長期進入穩定期時，向發酵培養基中添加質量濃度為0.5～2.5％的非離子型表面活性劑。

所述的非離子型表面活性劑為聚氧乙烯型非離子表面活性劑、多元醇型非離子型表面活性劑和烷基醇酰胺型非離子型表面活性劑。

所述聚氧乙烯型非離子表面活性劑為烷基酚聚氧乙烯醚、脂肪酸聚氧乙烯酯、聚乙二醇或聚氧乙烯胺。

所述多元醇型非離子型表面活性劑為失水山梨醇酯、吐溫、司盤或蔗糖酯。

所述烷基醇酰胺型非離子型表面活性劑為十二烷基二乙醇酰胺或烷基醇酰胺磷酸酯。

所述在發酵罐發酵培養結束對數生長期進入穩定期是指發酵罐發酵培養40小時后。

本發明通過在發酵培養至穩定期時向培養基中添加非離子型表面活性劑來增強菌絲體細胞膜通透性，從而促使細胞內的代謝物迅速釋放到細胞外，進而解除了大菌素甲基轉移酶的反饋抑制，提高了該酶的活力，最終促使泰樂菌素組分C向組分A的快速轉化。當前工業生產中泰樂菌素A組分普遍為80～85％。通過本發明能夠最終使泰樂菌素A組分含量達到90～94％。

具體實施方式

下面用實例予以說明本發明，應該理解的是，實例是用于說明本發明而不是對本發明的限制。本發明的范圍與核心內容依據權利要求書加以確定。

實施例1

1)發酵菌株的選擇：弗氏鏈霉菌(Strepyomyce?fradiae)。

2)1m³一級種子發酵罐培養基為：豆餅粉10kg、鹽酸甜菜堿0.5kg、玉米漿3kg、磷酸氫二銨0.2kg、碳酸鈣1.6kg、豆油13L。

3)10m³二級種子發酵罐培養基為：豆餅粉150kg、鹽酸甜菜堿5kg、磷酸氫二銨2kg、碳酸鈣15kg、混合魚粉80kg、玉米漿30kg、豆油100L。

4)100m³發酵罐發酵培養基為：豆油2000L、豆餅粉1500kg、混合魚粉700kg、磷酸氫二銨30kg、碳酸鈣200kg、鹽酸甜菜堿70kg、氯化鈷500g、氯化鉀50kg、氯化鈉100kg、硫酸鎂80kg。

具體發酵工藝步驟如下：

1)一級種子罐發酵培養：采用火焰接種法，將培養成熟的弗氏鏈霉菌種子液接入一級種子罐中進行培養，罐壓0.03MPa；罐溫28～29℃；空氣流量：0～20h：55m³/h；20h～移種：100/h；攪拌轉速80r/min；pH值6.5～6.8；培養時間20h。

2)二級種子罐發酵培養：將一級種子罐中發酵液全部移入二級種子罐進行培養；罐壓0.03～0.05MPa；罐溫28～29℃；空氣流量800m³/h；攪拌轉速120r/min；pH?6～7；h培養時間30h；