[發明專利]一種誘導巴西人參直接建成完整組培苗的方法

有效

• 申請號: 201210180184.5
• 申請日: 2012-06-01
• 公開（公告）號: CN103444521A
• 公開（公告）日: 2013-12-18
• 發明（設計）人: 許鴻章;陳汝賢;解云英;許鴻源;龔銀花;許皓翔
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院醫藥生物技術研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;張慶敏

技術領域

本發明屬于植物的組織培養領域，具體涉及一種誘導巴西人參直接建成完整組培苗的方法。

背景技術

巴西人參(Pfaffia?paniculata)亦稱琺非亞(Pfaffia)，系覓科(Amaranthaccac)牛膝屬多年生草本植物，原產南美洲巴西等國的熱帶雨林地區。巴西人參以根入藥，富含多種氨基酸、維生素、礦物質和皂甙，具有明顯的抗炎、鎮痛、壯陽和抗腫瘤作用。

為擴大我國的藥用植物資源，中國醫學科學院藥用植物研究所和廣西藥用植物園先后引種成功。但是，對其組培苗生產技術的研究較少，僅見凌征柱等人利用細胞分裂素N⁶-卞基腺嘌呤(BA)和生長素萘乙酸(NAA)，按照誘導外植體腋芽萌發、無根苗繼代擴繁、誘導生根的常規組織培養程序才獲得完整的組培苗[種子，2006，25(10)：20～21]。按照以上過程，獲得完整組培苗至少需要三種不同的復合型培養基，操作比較繁雜，且40天的培養周期增殖倍數僅達3.9。

發明內容

為簡化巴西人參組培苗的建成過程，提高生產效益，獲得優質組培苗，本發明的目的在于提供一種誘導巴西人參直接建成完整組培苗的方法。

本發明利用新型植物生長物質靈發素LFS(Lingfasu，亦稱狹霉素，代號PGR-08)同時具有細胞分裂素和生長素兩類植物生長調節劑生物活性的特點，將LFS加入到常規MS固體培養基中，誘導巴西人參直接建成完整組培苗。

本發明提供的誘導巴西人參直接建成完整組培苗的方法，包括如下步驟：

將經表面滅菌的巴西人參外植體帶腋芽莖段接種到含有靈發素LFS的MS固體培養基上，常規培養，直到獲得根苗齊全的巴西人參完整組培苗。

其中，獲得所述巴西人參外植體帶腋芽莖段的具體方法為：從巴西人參無病毒健康植株上采集已經硬化的幼枝，流水沖洗，擦干，切去頂芽和葉片，保留部分葉柄以保護腋芽，再分切成帶腋芽的單節莖段作為巴西人參外植體帶腋芽莖段。

其中，所述表面滅菌的具體方法為：在凈化工作臺上，將外植體帶腋芽莖段用75％酒精消毒，再用0.1％升汞消毒，消毒后用無菌水沖洗。

其中，所述MS固體培養基含靈發素LFS的濃度為0.1-1.0mg/L，優選為0.3mg/L。

其中，所述常規培養的培養條件為，白天溫度26-30℃，夜間溫度20-24℃，光照時間11小時/天，光照強度1500lx。

按照本發明的方法所獲得的巴西人參組培苗，作為組培擴繁增殖材料的應用，具體為將獲得的組培苗切除根、頂之后，切割為單節帶腋芽莖段，作為外植體帶腋芽莖段使用。

本發明還提供一種誘導巴西人參建成完整組培苗的方法在巴西人參良種繁育中的應用。

本發明還提供靈發素LFS在誘導巴西人參建成完整組培苗中的應用。

本發明的有益效果在于：

1)本發明中，添加了靈發素LFS的MS固體培養基適用于常規組織培養中誘導外植體腋芽萌發、繼代苗擴繁增殖及繼代苗生根這三個生產環節，無需再添加任何其它激素或調節劑，就能誘導巴西人參莖段腋芽迅速正常萌發生長，并形成不定根，直接建成根苗齊全的完整組培苗，使繁殖周期縮短為20d；

2)本發明使用添加了靈發素LFS的MS固體培養基完成常規要用三種復合培養基才能完成的巴西人參組培苗生產全過程，大大簡化培養基的配制和生產操作程序；

3)使用本發明組織培養巴西人參，增殖倍數顯著變大，生產效率成倍增加；

4)使用本發明組織培養巴西人參，獲得的組培苗根系發達，其質量顯著提高。

具體實施方式

以下實施例用于說明本發明，但不用來限制本發明的范圍。在不背離本發明精神和實質的情況下，對本發明方法、步驟或條件所作的修改或替換，均屬于本發明的范圍。

若未特別指明，實施例中所用的技術手段為本領域技術人員所熟知的常規手段。

實施例1誘導巴西人參外植體腋芽萌發

利用本發明誘導巴西人參外植體腋芽萌發。

從防蟲網內的無病毒健康植株上采集已經硬化的幼枝，到室內流水沖洗表面塵埃，干毛巾除去游離水，切去頂芽和葉片，保留部分葉柄以保護腋芽，再分切成帶腋芽的單節莖段作外植體帶腋芽莖段。

將外植體帶腋芽莖段在凈化工作臺上用75％酒精消毒30sec，再用0.1％升汞消毒5min，消毒后用無菌水沖洗6遍。