[發明專利]一種孔雀石綠的檢測方法及應用

無效

• 申請號: 201210179713.X
• 申請日: 2012-06-01
• 公開（公告）號: CN102661945A
• 公開（公告）日: 2012-09-12
• 發明（設計）人: 黃軼群;賴克強;張源園;張衍亮
• 申請（專利權）人: 上海海洋大學
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65;G01N1/28
• 代理公司: 上海天翔知識產權代理有限公司 31224
• 代理人: 呂伴

技術領域

本發明涉及孔雀石綠檢測技術領域，確切地說是一種利用表面增強拉曼光譜技術檢測孔雀石綠的方法和該方法的應用。

背景技術

中國是世界上第一大水產品生產國和出口國，但近年來，頻頻爆發的水產品安全事件不僅危及消費者的利益，更成為制約我國水產品正常出口的瓶頸。在眾多水產品安全事件中，因不恰當使用、過量使用甚至非法使用漁藥，導致的漁藥殘留超標現象最為嚴重。孔雀石綠，由于其殘留對人體具有“致癌，致畸，致突”的危害，已經被包括中國在內的許多國家禁止在水產養殖中使用，但因其價格低廉且藥效好的特點，仍被當作殺菌劑在水產養殖過程中非法使用。目前檢測水產品中孔雀石綠的標準方法主要有HPLC、LC/MS和GC/MS法。鑒于現行檢測手段耗時耗力、成本昂貴等特點，研究和開發操作簡便、快速準確的孔雀石綠檢測新方法，對于加強水產品質量安全的監控及促進水產品貿易發展具有非常重要的意義。

中國專利公開號CN101566674A公開了一種水體及水產品中孔雀石綠和無色孔雀石綠殘留的快速檢測方法，屬于水體及水產品中的殘留物檢測技術領域。該法是將待測樣品和提取劑I振蕩混合均勻后，加入提取劑II振蕩混合后靜置，取上清液加入到富集柱中，觀察富集柱中最下層的顯色劑顏色變化，若形成綠色環帶，則判斷待測樣品中含有孔雀石綠或無色孔雀石綠；提取劑I為乙腈、二氯甲烷、正己烷和對甲苯磺酸的混合液；提取劑II為二氧化鉛和酸性氧化鋁的混合物；待測樣品為待檢測水體樣品或待檢測水產品樣品。

發明內容

本發明所要解決的技術問題之一在于針對現有孔雀石綠的檢測標準方法所存在的不足而提供一種新的孔雀石綠的檢測方法。

本發明所要解決的技術問題之二在于該檢測方法的應用。

作為本發明第一方面的一種孔雀石綠的檢測方法，其特征是將孔雀石綠標準溶液滴加到納米金顆粒修飾的具有表面活性的拉曼基底上，待溶劑蒸干后，使用激光波長為633nm的共聚焦顯微拉曼光譜儀采集孔雀石綠表面增強拉曼光譜，該孔雀石綠表面增強拉曼光譜具有1610,1360,1170,798，913，432cm^-1處特征峰。

所述孔雀石綠標準溶液的配制方法如下：

準確稱取10.00mg孔雀石綠于100mL燒杯中，用一定體積乙腈（色譜純）完全溶解，最后定容在100mL容量瓶里，配制成100mg/Kg的孔雀石綠母液，再用一定體積比的乙腈和超純水作為溶劑將母液稀釋成系列濃度的標準溶液。

作為本發明第二方面的該檢測方法的應用，其特征在于，是用以檢測水體中的孔雀石綠殘留量。

作為本發明第二方面的該檢測方法的應用，其特征在于，是用以檢測水產品中的孔雀石綠及隱性孔雀石綠殘留。

在所述應用中，所述用以檢測水產品中的孔雀石綠及隱性孔雀石綠殘留需要對水產品進行前處理，所述前處理方法是：剪取水產品樣品，采用乙腈和乙酸銨緩沖溶液進行振蕩提取，隨后離心，重復兩次，合并上層提取液；用二氯甲烷對提取液進行萃取，重復兩次，合并下層有機相旋轉蒸發至干，提取物呈油狀；加入乙腈重新溶解油狀提取物；接著加入一定濃度二氯二氰基苯醌將隱性孔雀石綠氧化成孔雀石綠，待其氧化完全后得待檢溶液；其中所述乙腈和乙酸銨緩沖溶液中，乙腈總體積和乙酸銨的體積比約為10:1；液液萃取中二氯甲烷的總體積與提取液的體積比約為1:1；二氯二氰基苯醌體積與重新溶解后的提取物體積比約為1:1。

拉曼光譜是物質的散射光譜。拉曼光譜分析法是基于拉曼散射效應，對與入射光頻率不同的散射光譜進行分析得到分子振動、轉動方面的信息，進而用于分析分子結構的一種方法。但是拉曼散射效應非常弱,而表面增強拉曼技術（SERS）使用經特殊處理的表明粗糙的金屬（通常為金或銀），通過把待測物質有效吸附在金屬表面，可以使拉曼信號增大至原來的10³-10⁶倍。隨著新型納米粒子體系的應用推動SERS技術上到一個新臺階，甚至可以使拉曼信號放大至10¹⁴-10¹⁵倍，達到單分子檢測水平。

本發明結合納米金顆粒修飾的SERS活性基底和表面增強拉曼光譜技術，將其應用于檢測水產品的漁藥殘留孔雀石綠和隱性孔雀石綠中。此種新方法具有較高的檢測靈敏度，且大大縮短了檢測時間，節約了檢測成本。

附圖說明

圖1為本發明系列濃度孔雀石綠標準溶液的表面增強拉曼光譜圖。

圖2為本發明羅非魚中孔雀石綠提取物的表面增強拉曼光譜圖。