[發明專利]結核分枝桿菌Rv3120的重組蛋白、其制備方法及其在細胞免疫診斷中的應用

無效

• 申請號: 201210179661.6
• 申請日: 2012-06-01
• 公開（公告）號: CN102718848A
• 公開（公告）日: 2012-10-10
• 發明（設計）人: 張舒林;孫戰強;趙俊偉;余曉麗;王洪海
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: C07K14/35
• 分類號: C07K14/35;C12N15/31;C12N15/63;C12Q1/68;C12Q1/04;G01N33/68;G01N33/569
• 代理公司: 上海新天專利代理有限公司 31213
• 代理人: 祖志翔

1.一種結核分枝桿菌Rv3120重組蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO:1所示，通過使用pET32a質粒，在Rv3120該天然蛋白序列前面加了一段Trx·Taq和S·Taq融合標簽及His·Tag純化標簽。

2.根據權利要求1所述的Rv3120重組蛋白，其特征在于，所述Trx·Taq和S·Taq融合標簽及His·Tag純化標簽的氨基酸序列由SEQ?ID?NO:1中從氨基末端第1至第153位氨基酸殘基序列組成。

3.一種編碼權利要求1或2的Rv3120重組蛋白的核苷酸序列，其特征在于具有選自下列c）、d）或e）的核苷酸序列：

c）SEQ?ID?NO:2所示的核苷酸序列；

d）不同于SEQ?ID?NO:2但編碼的氨基酸序列與SEQ?ID?NO:2所編碼的氨基酸序列相同的核苷酸序列；

e）在嚴格雜交條件下與上述c）或d）中的序列雜交，并且編碼具有所述Rv3120重組蛋白活性的核苷酸序列。

4.根據權利要求1或2所述的結核分枝桿菌Rv3120重組蛋白的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）制備結核分枝桿菌菌株基因組DNA；

（2）擴增Rv3120基因；

（3）Rv3120基因插入表達質粒；

（4）將構建的表達質粒轉化入宿主細胞；

（5）誘導表達蛋白Rv3120；

（6）分離純化誘導表達產物，得到Rv3120重組蛋白，

其中，在制備結核分枝桿菌Rv3120基因中采用的引物為Rv3120-F和Rv3120-R，所述引物Rv3120-F的核苷酸序列如SEQ?ID?No:3所示，所述引物Rv3120-R的核苷酸序列如SEQ?ID?No:4所示。

5.權利要求1或2所述的結核分枝桿菌Rv3120蛋白在制備檢測或診斷結核病的試劑中的應用。

6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，所述Rv3120重組蛋白的基因引物為Rv3120-F和Rv3120-R，所述Rv3120-F的核苷酸序列為如SEQ?ID?No:3所示，所述Rv3120-R的核苷酸序列為如SEQ?ID?No:4所示。

7.權利要求1或2所述的結核分枝桿菌Rv3120重組蛋白、其特異性抗體或其基因引物在制備結核病檢測試劑盒中的應用。

8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，所述Rv3120重組蛋白的基因引物為Rv3120-F和Rv3120-R，所述Rv3120-F的核苷酸序列為如SEQ?ID?No:3所示，所述Rv3120-R的核苷酸序列為如SEQ?ID?No:4所示。

9.一種結核病檢測試劑盒，其特征在于，其組分中的檢測抗原是權利要求1或2所述的結核分枝桿菌Rv3120重組蛋白。