[發(fā)明專利]一種可對(duì)放流中國(guó)對(duì)蝦實(shí)現(xiàn)精確追溯的放流方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210179604.8
• 申請(qǐng)日: 2012-06-04
• 公開（公告）號(hào): CN102687692A
• 公開（公告）日: 2012-09-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王偉繼;孔杰;金顯仕
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所
• 主分類號(hào): A01K61/00
• 分類號(hào): A01K61/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種可對(duì)放流中國(guó)對(duì)蝦實(shí)現(xiàn)精確追溯的放流方法，其特征在于包括以下步驟：選擇確定遺傳背景、不攜帶特定病原的中國(guó)對(duì)蝦多個(gè)親本，將雌雄親本一對(duì)一定向交尾，交尾成功的雌蝦在眼柄套上標(biāo)記環(huán)后越冬培育，雄蝦眼柄標(biāo)記后放置在-70℃?zhèn)溆?，交尾雌蝦翌年進(jìn)行苗種培育，放流季節(jié)對(duì)所培育的中國(guó)對(duì)蝦幼苗進(jìn)行放流；秋季，在各放流洄游點(diǎn)進(jìn)行放流個(gè)體的捕撈取樣，樣品回捕后通過中國(guó)對(duì)蝦熒光標(biāo)記微衛(wèi)星四重PCR個(gè)體識(shí)別技術(shù)檢測(cè)放流個(gè)體及數(shù)量，最終確定中國(guó)對(duì)蝦的放流效果；

所述的中國(guó)對(duì)蝦熒光標(biāo)記微衛(wèi)星四重PCR個(gè)體識(shí)別技術(shù)，微衛(wèi)星引物組合及序列如下：

EN0033正向序列為：5′-CCTTGACACGGCATTGATTGG-3′，反向序列為：5′-TACGTTGTGCAAACGCCA?AGC-3′；

RS0622正向序列為：5′-TCAGTCCGTAGTTCATACTTGG-3′，反向序列為：5′-CACATGCCTTTGTGTGAAAACG-3′；

FCKR002正向序列為：5′-CTCAACCCTCACCTCAGGAACA-3′，反向序列為：5′-AATTGTGGAGGCGACTAAGTTC-3′；

FCKR013正向序列為：5′-GCACATATAAGCACAAACGCTC-3′，反向序列為：5′-CTCTCTCGCAATCTCTCCAACT-3′；

PCR反應(yīng)體系為：25μl反應(yīng)體系，其中包括2.5μl?10×PCR緩沖液、四種熒光標(biāo)記引物的濃度均為10μM，EN0033正反引物每條各為0.25μl，RS0622正反引物每條各為0.5μl，F(xiàn)CKR002正反引物每條各為0.5μl，F(xiàn)CKR013正反引物每條各為0.5μl；100ng基因組DNA、250μmol/L?dNTPs、2.0mmol/L?Mg²⁺、1單位Taq?DNA聚合酶；

擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃變性4min后進(jìn)行循環(huán)1：94℃變性40s，70℃退火1min，之后每個(gè)循環(huán)退火溫度降低1℃，72℃延伸1min，共循環(huán)5次；隨后進(jìn)行循環(huán)2：94℃變性40s，65℃退火1min，72℃延伸1min，共循環(huán)8次；再進(jìn)行循環(huán)3：94℃變性40s，64℃退火1min，之后每個(gè)循環(huán)退火溫度降低1℃，72℃延伸1min，共循環(huán)4次；進(jìn)行循環(huán)4：94℃變性40s，61℃退火1min，72℃延伸1min，共循環(huán)12次；最后72℃延伸5min，4℃保存并結(jié)束程序。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種可對(duì)放流中國(guó)對(duì)蝦實(shí)現(xiàn)精確追溯的放流方法，其特征在于所述的放流效果的確定是按如下公式計(jì)算的：放流回捕率＝放流個(gè)體數(shù)量/樣品總數(shù)。