[發(fā)明專利]用高極性流動相檢測含順反異構(gòu)的類胡蘿卜素含量的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210179393.8
• 申請日: 2012-06-04
• 公開（公告）號: CN102735767A
• 公開（公告）日: 2012-10-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 余龍江;王紅波;魯明波;何謐;何峰
• 申請（專利權(quán)）人: 華中科技大學(xué);湖北廣濟(jì)藥業(yè)股份有限公司;湖北普信工業(yè)微生物應(yīng)用技術(shù)開發(fā)有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 華中科技大學(xué)專利中心 42201
• 代理人: 曹葆青

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于食品分析與檢測領(lǐng)域，涉及用高極性流動相檢測含順反異構(gòu)的類胡蘿卜素含量的方法。該方法采用高效液相色譜法高靈敏度簡單測定類胡蘿卜素含量。可以同時測定三種主要類胡蘿卜素：番茄紅素、γ-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素的含量以及番茄紅素、γ-胡蘿卜素中順反異構(gòu)體的相對含量。

技術(shù)背景

高效液相色譜法（HPLC）因其檢測的有效性和準(zhǔn)確性而被廣泛應(yīng)用于類胡蘿卜素含量的測定。通常情況下，類胡蘿卜素的測定都用到了C18反相色譜柱為分離柱，用到了二氯甲烷作為流動相。二氯甲烷極性很低，在反相色譜柱中殘留量大，對C18反相色譜柱損害大，嚴(yán)重縮短了色譜柱的使用壽命。高效液相色譜儀中的塑料材質(zhì)的接頭和墊圈也會受到二氯甲烷的腐蝕。這些不利因素使得以C18反相色譜柱為分離柱以二氯甲烷為流動相的色譜法來檢測類胡蘿卜素的含量受到了很大的限制。

因此，用一種不以二氯甲烷為流動相的色譜法來取代當(dāng)前通用的C18柱為反相色譜柱以二氯甲烷為流動相的色譜法，對從事類胡蘿卜素生產(chǎn)的科研單位和企業(yè)都具有重要的現(xiàn)實意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供了一種用高極性流動相檢測含順反異構(gòu)的類胡蘿卜素含量的方法。該方法在測定層面上客觀真實的反映出番茄紅素、γ-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素的含量，同時也測定出番茄紅素和γ-胡蘿卜素中順反異構(gòu)體的相對含量，方法簡單、測定準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

用高極性流動相檢測含順反異構(gòu)的類胡蘿卜素含量的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

a.采用反相酰胺色譜柱；

b.以甲醇乙腈混合溶液作為色譜流動相，甲醇乙腈混合溶液中甲醇的體積百分比含量可以為0至50%之間；

c.所用條件為：柱溫：室溫；流速：0.2～0.6mL/min；檢測波長440～490nm；進(jìn)樣體積5～20μL；

d.采用乙腈溶解樣品。

作為上述技術(shù)方案的改進(jìn)，所述的反相酰胺色譜柱為AscentisRP-Amide規(guī)格為150mm×2.1mm,5μm或Halo?RP-Amide規(guī)格為150mm×3.0mm，2.7μm。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有的優(yōu)點和效果如下：

1.本發(fā)明的檢測分析方法分辨率、靈敏度高、重現(xiàn)性好、簡單易行。

2.本發(fā)明不用二氯甲烷為流動相，避免了二氯甲烷對色譜儀和色譜柱的腐蝕和堵塞，延長了色譜柱的使用壽命。

3.有效的檢測出番茄紅素和γ-胡蘿卜素中順反異構(gòu)體的相對含量。傳統(tǒng)C18柱檢測分析方法，不能檢測出番茄紅素和γ-胡蘿卜素的順反異構(gòu)體。

4.對色譜儀要求低，單泵系統(tǒng)即可完成檢測分析，適用性廣。

附圖說明

圖1是傳統(tǒng)的C18色譜柱檢測分析色譜圖；

圖2是實施例1的Ascentis?RP-Amide色譜柱檢測分析色譜圖；

圖3是實施例2的Ascentis?RP-Amide色譜柱檢測分析色譜圖；

圖4是實施例3的Ascentis?RP-Amide色譜柱檢測分析色譜圖；

圖5是實施例4的Halo?RP-Amide色譜柱檢測分析色譜圖；

圖6是實施例5的Halo?RP-Amide色譜柱檢測分析色譜圖；

圖7是實施例6的Halo?RP-Amide色譜柱檢測分析色譜圖。

具體實施方式

圖1是傳統(tǒng)的C18色譜柱HPLC檢測分析得到的色譜圖，該檢測分析方法的儀器與條件為：a.高效液相色譜儀：Agilent?1100；b.色譜柱：Agilent?Zorbax?SB-C18（250mm×4.6mm,5μm）；c.流動相：二氯甲烷乙腈（3:7）；流速：1mL/min；檢測波長：472nm；柱溫：室溫；進(jìn)樣體積：5μL）。該方法不能檢測分析出番茄紅素和γ-胡蘿卜素的順反異構(gòu)體。

圖2，圖3，圖4，圖5，圖6，圖7是本發(fā)明提供的HPLC檢測分析方法得到的色譜圖。本發(fā)明的檢測方法能檢測分析出番茄紅素和γ-胡蘿卜素的順反異構(gòu)體。圖1，圖2，圖3，圖4，圖5，圖6，圖7是對同一種類胡蘿卜素樣品檢測分析，采用不同的高效液相分析方法得到的HPLC色譜圖。

為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點更加清楚明白，以下結(jié)合附圖及實施例，對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。

實施例1

儀器與條件

高效液相色譜儀：Agilent?1200；