[發明專利]雙水相萃取分離黃芪黃酮、皂苷和多糖的方法

有效

• 申請號: 201210178211.5
• 申請日: 2012-06-01
• 公開（公告）號: CN102697839A
• 公開（公告）日: 2012-10-03
• 發明（設計）人: 池汝安;張越非;鐘玲;余軍霞;徐志高;肖春橋
• 申請（專利權）人: 武漢工程大學
• 主分類號: A61K36/481
• 分類號: A61K36/481;C08B37/00;A61P1/16;A61P9/10;A61P31/12;A61P29/00;A61P35/00;A61P37/02;A61P39/06
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 崔友明

技術領域

本發明屬于天然產物有效成分的分離純化領域，涉及一種雙水相萃取分離黃芪黃酮、皂苷和多糖的方法。

背景技術

黃芪為豆科植物蒙古黃芪(Astragalus?membranaceus)?或膜莢黃芪(Astragalus?membranaceus)的干燥根，具有補氣固表、利尿托毒、排膿、斂瘡生肌等功效。黃芪中的主要有效成分為黃酮類、皂苷類和多糖。其中黃酮類化合物主要包括芒柄花素(?formononetin)、芒柄花苷(ononion)、毛蕊異黃酮(calycosin?)及其糖苷等。研究證實黃芪總黃酮具有清除O^2-·和OH-·防止生物膜過氧化的作用，也能顯著抑制OH-·對DNA的損傷作用，是黃芪抗氧化作用的主要成分，表現為顯著的抗肝臟毒性、抗炎、抗菌及保護心血管系統的作用。黃芪總皂苷在免疫調節、心肌缺血保護等方面有顯著活性，其藥理作用廣泛，包括抗病毒、保肝、抑瘤、改善心臟功能、抗炎鎮痛、抑制滑膜成纖維細胞增殖等。

近年來，由于雙水相萃取技術具有高效、溫和、操作簡便、容易放大和能有效保持生物活性等優點，被廣泛應用于生物化學、細胞生物學和生物化工等領域。具體涉及到細胞、膜、病毒、蛋白質、核酸等生物產品以及其他天然藥物有效成分的分離和純化。但傳統的雙水相體系有原料成本較高，高聚物回收利用困難等缺點。隨著對雙水相技術研究的不斷深入，以無機鹽代替高聚物的普通有機物雙水相體系以其價廉、低毒、體系簡單、溶劑的回收利用及后續處理容易等優點，且由于體系組分極性較大，尤其適用于極性物質的提取和純化，使雙水相萃取的工業化成為可能。

發明內容

本發明的目的是為了克服上述現有技術存在的不足而提出一種雙水相萃取分離黃芪粗提物中黃芪黃酮、皂苷和多糖的方法，其不但避免了有毒溶劑的使用，提高了黃芪中總黃酮的提取率，且能將粗提品中的黃酮與親水性皂苷和少量多糖進行分離，達到純化黃芪黃酮并分離皂苷的目的，且方法本身操作簡單經濟。

本發明解決上述技術問題所采用的技術方案是：雙水相萃取分離黃芪粗提物中黃芪黃酮、皂苷和多糖的方法，其特征在于包括有以下步驟：

1）固液浸提：向黃芪藥材中加入溶劑，固液浸提，過濾除雜后靜置24-48小時，沉淀為多糖，濾液為黃芪粗提液；

2）雙水相萃取：將步驟1）所得黃芪粗提液，濃縮至原體積的1/5，加入無水乙醇、磷酸氫二鉀和水，形成體系內乙醇/磷酸氫二鉀的雙水相系統，混勻，保持pH為6.0-9.0，靜止后分為上下兩相；

3）減壓蒸餾，真空干燥：將步驟2）中所得含有大量黃芪總黃酮的乙醇上相，對其進行減壓蒸餾、真空干燥，得到黃芪總黃酮提取物，下相為富含黃芪皂苷的水相。

按上述方案，在固液浸提中，所述的溶劑體積分數為50-90%，黃芪藥材與溶劑固液比為1g∶5ml-?1?g∶30?ml，加熱回流提取3次，每次1小時，將提取液合并得到黃芪粗提液。

按上述方案，步驟1）所述溶劑為甲醇、乙醇和水中的任意一種或者它們的混合。

按上述方案，步驟2）所述的無水乙醇加入的質量分數為體系的22%-40%，所述的磷酸氫二鉀加入的質量分數為體系的15%-22%。

按上述方案，步驟2）所述的雙水相萃取中靜止分相溫度為8-80℃，分相時間為10分鐘。

按上述方案，在減壓蒸餾，真空干燥中，減壓蒸餾的溫度為50-80℃。

本發明的反應原理：當能與水混溶的普通的有機溶劑，如乙醇、異丙醇、丙酮等，加入到某些電解質水溶液中，利用鹽離子的水化作用，使鹽離子奪取原來與有機溶劑水合的水分子而釋放出有機溶劑分子，可形成有機溶劑/無機鹽雙水相體系。當生物物質或天然產物中的有效成分進入雙水相體系時，由于表面性質、電荷作用和各種力（憎水鍵、氫鍵和離子鍵）的存在和環境因素（濃度、溫度、pH?值以及離子的種類和強度等）的影響，生物物質或天然產物中的有效成分易在兩相間形成選擇性的分配。利用這一點，可以實現生物物質和天然產物中有效成分的提取、濃縮和分離。

與已有技術相比，本發明的優點在于：

1）分相迅速，回收率高

在實驗中觀察到，采用雙水相萃取法，約10分鐘即可分相，并且沒有乳化層，縮短了實驗周期，且回收率高；

2）過程集成

雙水相萃取既達到了純化的目的，又濃縮了料液，濃縮倍數達到4倍以上；

3）避免了有毒溶劑正丁醇的使用，采用低毒的無水乙醇，利用環保且節約試劑；

4）界面張力小，有助于兩相之間的質量傳遞；