[發明專利]串聯液相色譜-質譜法測定食品中剛果紅的方法及應用

有效

• 申請號: 201210178206.4
• 申請日: 2012-06-01
• 公開（公告）號: CN102680634A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發明（設計）人: 凌睿;胡文彥;胡飛杰;喬玲
• 申請（專利權）人: 南京市產品質量監督檢驗院
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 胡錫瑜

一．技術領域

本發明屬于食品檢測技術領域，具體涉及應用串聯液相色譜質譜聯用技術對各種食品中非法添加的剛果紅染料進行準確測定的方法及其應用。

二．背景技術

剛果紅(Congo?Red，Direct?Red?28，CAS?573-58-0)又名直接大紅28，屬于聯苯胺為母體的紅色偶氮染料，一般用于臨床診斷，指示劑、生物染色劑及化學指示劑等。它對各種動物機體為可疑致癌物與誘變劑，并對胎兒性腺發育產生不良影響，同時，在特定條件下，剛果紅可降解釋放出聯苯胺類物質。由于對人體健康的危害很大，在很多國家已經成為禁用偶氮染料。

近年來食品安全事件頻繁發生，其中添加非食用甚至有毒物質的情況尤為突出，基于價格便宜、著色強、穩定性強等特點，非食用工業染料被應用到食品加工中。不法食品加工商為使肉制品色澤鮮艷，從外觀上吸引顧客，隨意使用有毒的工業染料代替食用色素加以使用，對廣大群眾的身體健康造成極大的危害。本機構在食品風險監測過程中發現肉制品中被非法添加一種紅色未知染料，經確證為致癌偶氮染料剛果紅。剛果紅不是食品添加劑，而是一種有毒的非食用物質，在食品中添加非食用物質是嚴重威脅人民群眾飲食安全的犯罪行為，同時也是阻礙我國食品行業健康發展、破壞社會主義市場經濟秩序的違法犯罪行為。因此有必要建立一種靈敏、準確、快速的肉制品中剛果紅的檢測方法。

國內外有關食品中剛果紅染料的測定未見報道，侍芳采用液相色譜單級質譜（LC-MS）測定了環境水樣中剛果紅的含量，該方法由于樣品基質及儀器設備的限制，不適用于食品中剛果紅的準確測定。由于食品基質比較復雜，加上食品中非法添加的工業染料多為水溶性鹽類，前處理多采用固相萃?。⊿PE）、液液萃?。↙LE）以及基質固相分散（MSPD）等技術去除樣品中的大量雜質，而后采用液相色譜及液相色譜質譜聯用法對其進行測定。

三．發明內容

本發明需要解決的問題是采用串聯液相色譜質譜聯用法準確測定食品中剛果紅的方法及應用。首先，如何從食品中快速有效的將非法添加的剛果紅染料快速提取出來，同時最大限度減低基質干擾。經過大量的試驗篩選，本發明最終選擇乙腈-正己烷按體積比1:1混合的溶劑作為樣品的提取溶劑，考慮到乙腈會溶解一部分正己烷，因此乙腈要預先用正己烷溶液飽和，這樣定量計算時不至于產生誤差。剛果紅非常容易溶解于乙腈等強極性溶劑，而幾乎不溶于正己烷，且正己烷是一種油脂的良好溶劑，可以有效的去除油脂。樣品經混合溶劑提取后，剛果紅富集于乙腈層中，棄去的正己烷中含有大量的低極性雜質，這樣簡單快速的前處理步驟是非常有效的。其次，如何選擇最優的色譜及質譜條件，使得在盡可能短的時間內對樣品中的剛果紅染料進行分析，并產生最高的靈敏度。本發明在對剛果紅染料性質進行詳細了解的前提下，不斷優化儀器條件，最終選定的液相條件為采用10?mmol甲酸銨水溶液-乙腈為流動相梯度洗脫，質譜采集m/z?651.0/152.0及m/z?325.0/416.0離子信號，分別作為定量離子對與定性離子對進行分析，使用外標法定量。

本發明的技術方案包括：

1.?質譜參數的選擇與優化??

在實驗前采用系統的autotune功能對質譜系統各參數進行快速優化。剛果紅分子量為696.69，選擇掃描范圍m/z100-1000，斷開色譜柱，進樣器將標準溶液直接進質譜分析，同時采集正負離子信號，發現目標物在負離子模式下的響應值遠大于正離子模式，該現象和剛果紅帶兩個磺酸結構有關。剛果紅的一級質譜在ESI負離子化模式下產生m/z?651.0[M-2Na+H]-及m/z?325.0[M-2Na]2-兩個離子信號，符合文獻報道的聯苯胺偶氮染料電噴霧質譜特征。選擇m/z651.0進行子離子掃描，生成的主要碎片離子為m/z?152.0，其為母離子失掉兩側偶氮苯磺酸結構后剩余的聯苯基團（圖1.C），改變碰撞電壓沒有其他明顯離子出現。再選擇m/z325.0進行子離子掃描，生成的主要碎片離子為m/z416.0，其為母離子一側的偶氮N=N鍵斷裂后剩余的碎片基團（圖1.C），因剛果紅為對稱結構，它的豐度較前者要高，適合作為定量離子，同時改變碰撞電壓也沒有其他明顯離子出現。將相關聯的離子對中豐度較大的一對即325.0/416.0作為定量離子對，651.0/152.0作為定性離子對。最后對其裂解電壓參數及碰撞電壓進行優化，選擇本發明中具體實施方案2中規定的質譜條件進行檢測。

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2.?色譜條件的優化??