[發(fā)明專利]一種顯色測定一氧化氮的新方法

無效

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• 申請日: 2012-06-01
• 公開（公告）號: CN102680466A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發(fā)明（設計）人: 李永繡;鄒秀新;劉艷珠;張玲;張詩晗;李東平;周雪珍;唐群;李靜
• 申請（專利權）人: 南昌大學
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/31
• 代理公司: 南昌市平凡知識產權代理事務所 36122
• 代理人: 夏材祥

技術領域

本發(fā)明屬于化學與生物化學領域，主要涉及一類稀土水楊酸酯配合物與一氧化氮的特征顯色反應及其基于這一特征反應的一氧化氮檢測方法，可廣泛用于化學、生物、醫(yī)藥及環(huán)境監(jiān)測等領域。

背景技術

一氧化氮不僅僅是大氣的污染物，也是生物體內的信號分子，參與很多的生理過程。一氧化氮是近二十年來發(fā)現(xiàn)的一種新的細胞信使分子和效應分子，它能夠自由透過細胞膜，是迄今為止發(fā)現(xiàn)的體內最小、最輕、最簡單的信息傳遞分子。鑒于一氧化氮的重要性，各國的化學家、生物學家和醫(yī)學家爭相對其進行研究。目前，雖然已有大量的關于一氧化氮的實驗和理論化學的文獻，但是人們還不完全了解一氧化氮具體是怎樣參與生理過程的。為了弄清楚這個問題，就有必要發(fā)展一種實時、特異、直接而簡單的方法來檢測生物體內的一氧化氮。其實，目前已有很多關于一氧化氮的檢測方法，比如熒光法、電子順磁共振法（EPR）、Griess試劑法、熒光探針法和電化學方法等等，但是都有其各自的優(yōu)缺點，不盡如人意。其中應用最廣的是Griess?試劑法。該方法是在酸性條件下，亞硝酸根NO₂^-可與Griess?試劑〔對氨基苯磺酸、N-(1-萘)?乙二胺、鹽酸(或磷酸)〕發(fā)生重氮化反應，生成粉紅色的重氮化合物。該化合物在540~560nm波長處有最大吸收，且吸光度的值與亞硝酸根NO₂^-的量成線性關系。因而可以用可見分光光度計測定亞硝酸根NO₂^-的含量，從而推算出一氧化氮的量，間接測量一氧化氮。該方法簡便易行，目前已有專門的試劑盒出售，應用范圍較廣。但是該方法靈敏度低，且不宜用于測定生物樣品。

發(fā)明內容

本發(fā)明以高氯酸釔和水楊酸甲酯的配合物與一氧化氮的特征顯色反應為基礎，提出和建立一套能夠快速檢測一氧化氮含量的，裸眼即可識別的簡便方法。其基本原理是利用稀土與水楊酸酯的配位作用來促進一氧化氮的部分氧化并形成穩(wěn)定的鈷藍色三氧化二氮，并通過觀察其在600-700nm范圍的特征顏色來進行定性檢測，根據測定的吸光度來進行定量分析。

本發(fā)明的目的是通過以下步驟來實現(xiàn)的：

以酯類、醇類或酮類有機溶劑為一氧化氮吸收液，以高氯酸稀土和水楊酸酯摩爾比為1:1的酯類、醇類或酮類溶液為顯色液，將吸收了一氧化氮的吸收液加入到顯色液中，混合，在50-150℃之間加熱反應一段時間后即可進行比色測定；所用高氯酸稀土是釔或鑭系的稀土元素，所用水楊酸酯是水楊酸甲酯、水楊酸乙酯、水楊酸丁酯或水楊酸苯酯，所用溶劑是乙酸乙酯，乙酸丙酯，乙酸丁酯，乙酸戊酯，乙醇或丙酮；?

上述以高氯酸稀土、水楊酸酯為反應試劑，有機溶劑為反應溶劑的具體比色測定步驟為：取一氧化氮的有機溶劑吸收液與高氯酸稀土和水楊酸酯的有機溶劑顯色液于10ml的比色管內混合，其中顯色液中高氯酸稀土和水楊酸酯物質的量與一氧化氮吸收液中一氧化氮物質的量之比大于6:1，用有機溶劑定容至5ml或10ml，于100℃下反應20min后將比色管置于冷水中冷卻10min，以試劑空白為參比，測定反應溶液在640nm處的吸光度，根據在相同條件下所作的一氧化氮工作曲線計算出樣品中的一氧化氮含量。

以高氯酸釔、水楊酸甲酯為反應試劑，乙酸丁酯為反應溶劑的具體比色測定方法為：取一氧化氮的乙酸丁酯吸收液與高氯酸釔和水楊酸甲酯的乙酸丁酯顯色液于10ml的比色管內混合，其中顯色液中高氯酸釔和水楊酸甲酯的物質的量與一氧化氮吸收液中一氧化氮物質的量之比為7：1，用乙酸丁酯定容至10ml，于100℃下反應20min后將比色管置于冷水中冷卻10min，以試劑空白為參比，測定反應溶液在640nm處的吸光度，根據在相同條件下所作的一氧化氮工作曲線計算出樣品中的一氧化氮含量。

本發(fā)明的有益效果是：該方法主要基于一氧化氮與高氯酸釔和水楊酸甲酯的配合物在一定溫度下的有機溶劑中反應能夠形成比較穩(wěn)定的藍綠色產物，而且該產物的吸光度與一氧化氮的濃度之間有良好的線性關系。因此，可以用簡單的比色法或裸眼觀察法來進行一氧化氮的定量和定性分析，無需專門的高檔儀器。在確定的最佳顯色反應條件下，反應產物在2h內的穩(wěn)定性好，方法的重現(xiàn)性好，最低檢出限可達2.61×10^-8?mol/L，摩爾吸光系數為1.01×10³?L·mol^-1·cm^-1。

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表1為高氯酸釔和水楊酸甲酯比例與反應產物吸光度的關系，證明以1:1為最佳。