[發明專利]一種布魯氏菌DNA疫苗及其構建方法與應用無效
| 申請號： | 201210176460.0 | 申請日： | 2012-05-30 |
| 公開（公告）號： | CN102772793A | 公開（公告）日： | 2012-11-14 |
| 發明（設計）人： | 藺國珍;邱昌慶;鄭福英;景志忠 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院蘭州獸醫研究所 |
| 主分類號： | A61K39/10 | 分類號： | A61K39/10;A61K48/00;A61P31/04;C12N15/85;C12R1/01 |
| 代理公司： | 蘭州振華專利代理有限責任公司 62102 | 代理人： | 張晉 |
| 地址： | 730046 *** | 國省代碼： | 甘肅;62 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 布魯氏菌 dna 疫苗 及其 構建 方法 應用 | ||
1.一種布魯氏菌DNA疫苗，其特征在于疫苗中包含了布魯氏菌P39和18KD基因，并可以在真核細胞中通過IRES介導共表達。
2.根據權利要求1所述的布魯氏菌DNA疫苗，其特征在于DNA疫苗中有SEQ1基因序列。
3.根據權利要求2所述的布魯氏菌DNA疫苗，其特征在于DNA疫苗為pcDNA-P39/18KD重組質粒。
4.權利要求3所述的布魯氏菌DNA疫苗制備方法，其特征在于：
a.以流產布魯氏菌2型CVCC?12的總DNA為模板，分別用P39S引物SEQ2、SEQ3和18KDS引物SEQ4、SEQ5進行聚合酶鏈式反應，分別得到P39和18KD蛋白基因，然后將PCR擴增產物經瓊脂糖凝膠電泳后，回收目的基因并進行純化，再分別將P39和18KD基因克隆到pMD18-T載體，獲得分別命名為pMD-P39和pMD-18KD的陽性質粒；
b.將a步驟所得的pMD-P39和pQCXIX?Retroviral?Vector質粒雙酶切后，用瓊脂糖凝膠電泳并用膠回收試劑盒進行切膠純化，將回收后的P39目的片段用T4DNA連接酶連入pQCXIX載體的MCS?I位點中，再轉化JM109感受態細胞，得到命名為pQC-P39的陽性的質粒；再將pMD-18KD和pQC-P39陽性質粒，用Mlu?I和Xho?I內切酶分別進行進行雙酶切，瓊脂糖凝膠回收將18KD目的基因克隆到pQC-P39載體的MCS?II位點中，轉化E.coli?DH5α感受態細胞，再在Amp抗性平板中挑取單克隆，并于LB液體培養基37℃220rpm搖床過夜增菌后，得到命名為pQC-P39/18KD的陽性質粒；
c.將陽性pQC-P39/18KD和pcDNA3.1質粒，用Not?I和Xho?I內切酶分別進行雙酶切，然后純化回收P39-IRES-18KD目的片段和線性化pcDNA3.1-GFP載體，回收產物用T4DNA連接酶進行連接，然后再轉化入E.coli?DH5α，得到pcDNA-P39/18KD重組質粒。
5.權利要求3所述的布魯氏菌DNA疫苗制備方法中所用的P39S引物SEQ2、SEQ3。
6.權利要求3所述的布魯氏菌DNA疫苗制備方法中所用的18KDS引物SEQ4、SEQ5。?
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