[發明專利]大孔樹脂分離鴨膽汁中鵝去氧膽酸的方法

有效

• 申請號: 201210175306.1
• 申請日: 2012-05-30
• 公開（公告）號: CN102703556A
• 公開（公告）日: 2012-10-03
• 發明（設計）人: 吳憲君;干文冬;吳昱隆;寧玉蓉
• 申請（專利權）人: 綿陽勁柏生物科技有限責任公司
• 主分類號: C12P33/00
• 分類號: C12P33/00;C07J9/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種大孔樹脂分離鴨膽汁中鵝去氧膽酸的方法，其特征在于該工藝分為兩步：

第一步為微生物溶液制作：

取動物回腸及大腸，刮出回腸和大腸中的內容物；

在刮出的內容物中，添加內容物體積0.5-10倍的水稀釋混勻，過濾除掉固體雜質，得到濾液；

按濾液體積加入0.1-0.5倍的MRS培養基，保持溫度在35-42℃，培養24-72小時，得培養液；

用離心機分離培養液，得到沉淀物；

加沉淀物重量1-100倍的無菌生理鹽水混懸，得到能水解結合型膽汁酸的微生物溶液；

常溫保存微生物溶液，備用；

第二步為大孔樹脂分離鴨膽汁中鵝去氧膽酸：

取鴨膽汁，按膽汁量體積添加微生物溶液0.5ml-6ml/L混合均勻，得混合液；

混合液在25℃-42℃溫度條件下，反應24-72小時，得游離型膽汁酸溶液中間體；

從中間體中過濾出濕游離型膽汁酸；

按游離型膽汁酸濕重添加5-20倍水稀釋成稀釋液，并用碳酸鈉或氫氧化鈉調稀釋液pH值至8-10；

按稀釋液重量的0.1-0.2倍加入水飽和的硫酸鎂，并混合均勻充分反應，得到膽汁酸鎂鹽，再在膽汁酸鎂鹽中加鹽酸調pH值至4.5-6.5，過濾得到游離型膽汁酸鎂鹽；

或按稀釋液重量的0.1-0.2倍加入水飽和的氯化鈣，并混合均勻充分反應，得到膽汁酸鈣鹽，再在膽汁酸鈣鹽中加鹽酸調pH值至4.5-6.5，過濾得到游離型膽汁酸鈣鹽；

按游離型膽汁酸鎂鹽或游離型膽汁酸鈣鹽重量4-10倍的比例加入濃度為60-90％的甲醇或乙醇回流溶解游離型膽汁酸鎂鹽或游離型膽汁酸鈣鹽得溶解液；

將溶解液置于裝有大孔樹脂的層析柱中，層析柱中的大孔樹脂裝入量為每升層析柱體積裝入0.5-0.8kg大孔樹脂；

然后：

第一步：用層析柱體積2-10倍量的濃度為35-55％甲醇或乙醇洗脫掉溶解液中的親水性雜質；

第二步：再用層析柱體積5-10倍量的濃度為60-80％甲醇或乙醇洗脫層析柱得到鵝去氧膽酸溶液；

鵝去氧膽酸溶液按每升加入1-4g碳酸鈉或氫氧化鈉，加熱回收鵝去氧膽酸溶液中的甲醇或乙醇，至鵝去氧膽酸溶液中的甲醇或乙醇濃度在10％以下，冷卻至常溫后過濾，濾液按1-5g/L的量加入工業用雙氧水脫色10-24小時后，用鹽酸調pH值至2.5-4.5，再過濾，濾餅用水洗至pH值至中性，低溫烘干濾餅，就得到鵝去氧膽酸。

2.根據權利要求1所述的大孔樹脂分離鴨膽汁中鵝去氧膽酸的方法，其特征在于在第二步洗脫層析柱后，按層析柱體積5-10倍量的濃度為90％以上甲醇或乙醇再次洗脫層析柱，洗脫后的層析柱下次備用。