[發明專利]利用植物病毒載體進行miRNA靶標模擬序列構建和表達的方法有效
| 申請號： | 201210174886.2 | 申請日： | 2012-05-30 |
| 公開（公告）號： | CN102703500A | 公開（公告）日： | 2012-10-03 |
| 發明（設計）人： | 劉玉樂;湯旸;沙愛華 | 申請（專利權）人： | 清華大學 |
| 主分類號： | C12N15/83 | 分類號： | C12N15/83;C12N15/66;A01H5/00 |
| 代理公司： | 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245 | 代理人： | 關暢;任鳳華 |
| 地址： | 100084 *** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 利用 植物 病毒 載體 進行 mirna 靶標 模擬 序列 構建 表達 方法 | ||
1.構建miRNA靶標模擬序列表達載體的方法，包括如下步驟：
1）化學合成編碼所述miRNA靶標模擬序列的雙鏈DNA分子，所述雙鏈DNA分子的兩端均帶有限制性內切酶粘性末端或平末端；
2）將所述雙鏈DNA分子插入載體的所述限制性內切酶位點間，得到表達所述miRNA靶標模擬序列的重組表達載體。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述miRNA為序列表序列2所示的miRNA158或序列表序列3所示的miRNA172。
3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述載體為植物病毒表達載體。
4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：所述植物病毒表達載體為序列表序列1所示的植物病毒表達載體pTY102。
5.一種抑制植物miRNA表達量的方法，包括將使用權利要求3或4所述方法得到的重組表達載體導入所述植物中，使所述植物中所述miRNA靶基因的表達量升高。
6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于：當所述植物病毒表達載體為所述植物病毒表達載體pTY102時，所述植物為煙草脆裂病毒的宿主植物。
7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于：所述煙草脆裂病毒的宿主植物為煙草。
8.根據權利要求5-7中任一所述的方法，其特征在于：當所述miRNA為miRNA158時，所述miRNA靶基因為BP525786和/或DV159037，當所述miRNA為miRNA172，所述miRNA靶基因為NbAP2-like。
9.序列表序列1所示的植物病毒表達載體pTY102。
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