[發明專利]RGD肽修飾的咔啉并六氫吡嗪-1,4-二酮、其制備方法、抗血栓作用和應用

有效

• 申請號: 201210173600.9
• 申請日: 2012-05-29
• 公開（公告）號: CN103450334A
• 公開（公告）日: 2013-12-18
• 發明（設計）人: 趙明;彭師奇;王玉記;吳建輝;韓爽
• 申請（專利權）人: 首都醫科大學
• 主分類號: C07K5/11
• 分類號: C07K5/11;C07K1/06;C07D471/14;A61K31/4985;A61P7/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及通式1代表的(R代表Arg-Gly-Asp-Val，Arg-Gly-Asp-Phe和Arg-Gly-Asp-Ser)咔啉并六氫吡嗪-1，4-二酮與RGD四肽的三種新型綴合物，以及它們的雜環核(R代表OH)，涉及它們的制備方法，還涉及它們的體外抗血小板聚集作用，進一步涉及它們在大鼠血栓形成模型上的抗血栓作用。結果表明，本發明的通式1的(R代表Arg-Gly-Asp-Val，Arg-Gly-Asp-Phe和Arg-Gly-Asp-Ser)咔啉并六氫吡嗪-1，4-二酮與RGD四肽的三種新型綴合物以及它們的雜環核(R代表OH)具有良好的抗血栓活性，在抗血栓劑的制備中有明確的應用前景。本發明屬于生物醫藥領域。?

背景技術

在全球范圍內，血栓性疾病的發病率和死亡率都居首位。血栓患者體內的血栓有兩種，一種是由血小板通過纖維蛋白原與白血球交聯構成的血栓，另一種是由血小板通過纖維蛋白原與血小板交聯構成的血栓。?

P-選擇素以溶解型P-選擇素和不溶型P-選擇素兩種形態存在。在血小板活化狀態下，不溶型P-選擇素從血小板內膜層快速移動到活化的血小板的表面表達并被切割為溶解型P-選擇素進入血液循環。溶解型P-選擇素介導形成大量穩定的由血小板通過纖維蛋白原與白血球交聯構成的血栓。雖然抑制不溶型P-選擇素表達并被切割為溶解型P-選擇素被認為是是設計抗血栓藥物的重要靶點，但是幾乎沒有抗血栓化合物與這個靶點相關聯。這種狀況使得發明人把尋找抑制不溶型P-選擇素表達并被切割為溶解型P-選擇素的化合物作為重要研究方向。在合理設計和廣泛的篩選結果的支持下，結構式II代表的咔啉并六氫吡嗪-1，4-二酮-3-乙酸被確定為先導化合物之一。實驗研究表明，在10^-8M濃度下它能夠使大鼠活化的血小板表達P-選擇素的量從210.55±2.98ng/ml降低到110.12±3.96ng/ml(p＜0.001)。?

血小板被激活時糖蛋白IIb/IIIa外化，與纖維蛋白原結合，使血小板通過纖維蛋白原與血小板交聯構成血栓。研究糖蛋白IIb/IIIa與纖維蛋白原α鏈及纖維蛋白原γ鏈的結合方式，確定了RGDS，RGDV和RGDF是血小板聚集過程中導致纖維蛋白原被糖蛋白IIb/IIIa識別并與纖維蛋白原結合的關鍵序列。采用RGDF或RGDS或RGDV的相關序列占據血小板活化狀態下糖蛋白IIb/IIIa上纖維蛋白原的結合位點是抑制由血小板通過纖維蛋白原與血小板交聯構成的血栓的重要手段。?

在獲得了結構式II代表的咔啉并六氫吡嗪-1，4-二酮-3-乙酸在10^-8M濃度下能有效抑制大鼠活化的血小板表達P-選擇素這樣一個突破之后，把RGD肽與之結合就成為發明人創造抑制溶解型P-選擇素介導的由血小板通過纖維蛋白原與白血球交聯構成的血栓和抑制糖蛋白IIb/IIIa介導的血小板通過纖維蛋白原與血小板交聯構成的血栓的新型抗血栓劑的核心創新和關鍵技術。這種核心創新和關鍵技術的進步必然使本發明的化合物的抗血栓有效劑量大幅度下降。于是，發明人提出了本發明。?

發明內容

本發明的內容之一是提供通式I代表的四種化合物，式中R為OH，Arg-Gly-Asp-Val，Arg-Gly-Asp-Phe或Arg-Gly-Asp-Ser。?

本發明的內容之二是提供合成通式I代表的化合物的方法，該方法包括：?

(1)制備3S-1，2，3，4-四氫-β-咔啉-3-羧酸；?

(2)制備3S-1，2，3，4-四氫-β-咔啉-3-羧酸甲酯；?

(3)將3S-1，2，3，4-四氫-β-咔啉-3-羧酸甲酯與Boc-Asp(OBzl)偶聯，制得3S-N-[Boc-Asp(OBzl)]-1，2，3，4-四氫-β-咔啉-3-羧酸甲酯；?

(4)從3S-N-[Boc-Asp(OBzl)]-1，2，3，4-四氫-β-咔啉-3-羧酸甲酯脫Boc制得的?3S-N-[Asp(OBzl)]-1，2，3，4-四氫-β-咔啉-3-羧酸甲酯鹽酸鹽制備(3S，12aS)-3-芐氧羰基-2，3，6，7，12，12a-六氫吡嗪并[1’，2’:1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，4-二酮；?