[發明專利]一種海鞘低分子多肽的制備方法

在審

• 申請號: 201210173031.8
• 申請日: 2012-05-14
• 公開（公告）號: CN103421870A
• 公開（公告）日: 2013-12-04
• 發明（設計）人: 張建芳
• 申請（專利權）人: 寧波博豐生物科技有限公司
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/34
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• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于一種海產品提取的方法，具體的說是一種海鞘多肽的提取制備方法。

技術背景

海鞘是脊索動物門，海鞘綱尾索動物，全世界約有1250種，在潮間帶、開放海域和深海海洋均有分布，其生長、繁殖、新陳代謝、適應機制等許多方面具有顯著的特性，在我國有著豐富的海鞘自然資源，目前已發現有103種，其中渤海5種，黃海21種，東海24種，南海53種。由于海鞘在進化上所處的特殊地位，收到動物學者、進化論學者和內分泌學者的高度專注，成為研究開發熱點。20世紀80年代以來，人們從海鞘體內發現了許多抗腫瘤、抗病毒、抗微生物以及免疫調節、生物催化等生理活性物質，尤其以抗腫瘤活性物質最為引人矚目，而且富含優質活性膠原蛋白。膠原蛋白作為一種重要的生物體組織結構蛋白，越來越引起人們的關注和興起，市場潛力巨大，經濟價值較高，特別是膠原蛋白小分子活性多肽，被廣泛的應用于醫藥，美容保健和食品行業。而且在首先進入臨床階段的6個海洋生物抗腫瘤藥物中，有3個來自海鞘。目前傳統提取工藝可分為五類，即酸法、堿法、酶法、鹽法以及熱水浸提法等。這些方法雖然工藝簡單，成本也較低但是由于提取過程中會使用大量的淡水和酸堿鹽，屬于高能耗產業，排放的酸堿鹽對周圍環境將產生一定的生態影響。不符合綠色可持續性經濟發展模式。熱水浸提法需要使用大量的淡水和能源，不符合國家及世界經濟發展的主流。

生物酶法是利用酶反應的溫和高效性在一定的環境條件下將膠原蛋白從不同的原料中提起出來，目前最常用的酶有胃蛋白酶、胰蛋白酶、酸性蛋白酶、堿性蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶。隨著酶制劑工業的不斷發展與應用領域的不斷擴寬，酶制劑產量迅速增長，市場競爭優勢不斷增加。膜分離濃縮純化技術是利用不同孔徑的膜將目標產物根據其分子大小進行分離、濃縮進一步純化提起的新型方法，在生產效率，能耗和性能方面具有明顯的優勢，已在生物醫藥、化工和食品行業應用廣泛，加之目前膜工業化發展迅速，配套產品齊全，成本不斷降低，是工藝升級的最佳選擇。

發明內容

本發明針對海鞘原料特點，將生物酶解技術和膜技術科學合理的進行整合，采用工業用膠體磨對原料進行前期超微粉碎處理，通過大通量高速連續離心分離設備對水溶性非膠原蛋白及其他活性物質進行分離，含膠原蛋白和其他活性物質的沉淀經過復合生物酶解技術水解為活性小分子多肽后，經過特定孔徑的膜進行分離濃縮提純后，得到一定濃度的活性小分子多肽漿液，最后經過超微噴粉干燥得到高純度分子量小于2KD膠原蛋白活性小分子多肽白色粉末。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：對原料海鞘進行浸泡清洗后，首先使用粉碎機對其進行粉碎處理為流體漿狀物后，進入工業級膠體磨超微粉碎至粒徑30～50微米左右，與2～6倍體積水混合均勻后進入高速離心機8000～12000轉/分鐘連續離心分離30分鐘去除非膠原蛋白等的水溶性物質，含膠原蛋白和其他活性物質的沉淀物與3～5倍體積的水進入生物酶解罐進行復合酶解處理。復合酶主要組成為胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和膠原蛋白酶，添加量為原料的0.2～2％，反應條件為溫度37～55℃，PH7.5～8.0，反應時間2～6小時，酶解罐出口與膜分離器連接，超濾膜的透過分子量是2KD，分子量小于2KD的通過超濾膜后直接進入納濾膜進行脫鹽濃縮處理后進行噴粉干燥，分子量大于2KD的部分回流到生物酶解罐繼續酶解。

本發明的有益效果是：最大限度利用酶和原料價值，進一步降低生產成本，這一工藝發明提高了海鞘多肽提取率和純度，其中大量的水資源循環利用，降低生產能耗。

具體實施方案

實例1：對原料海鞘進行浸泡清洗后，首先使用粉碎機對其進行粉碎處理為流體漿狀物后，進入工業級膠體磨超微粉碎至粒徑30微米左右，與4倍體積水混合均勻后進入高速離心機12000轉/分鐘連續離心分離30分鐘去除非膠原蛋白和其他活性物質的水溶性物質，含海鞘多肽的沉淀物與2倍體積的水進入生物酶解罐進行復合酶解處理。復合酶主要組成為胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和膠原蛋白酶，添加量為原料的0.2％，反應條件為溫度40℃，PH8.0，反應時間2.5小時。酶解產物用超濾設備處理，超濾膜的透過分子量是2KD，分子量小于2KD的通過超濾膜后直接進入納濾膜進行脫鹽濃縮后進行噴粉干燥，即為成品。分子量大于2KD的部分返回到生物酶解罐繼續酶解。

實例2：對原料海鞘進行浸泡清洗后，首先使用粉碎機對其進行粉碎處理為流體漿狀物后，進入工業級膠體磨超微粉碎至粒徑50微米左右，與2倍體積水混合均勻后進入高速離心機8000轉/分鐘連續離心分離30分鐘去除非膠原蛋白的水溶性物質，含膠原蛋白的沉淀物與5倍體積的水進入生物酶解罐進行復合酶解處理。復合酶主要組成為胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和膠原蛋白酶，添加量為原料的2％，反應條件為溫度50℃，PH7.5，反應時間4.5小時。酶解產物用超濾設備處理，超濾膜的透過分子量是2KD，分子量小于2KD的通過超濾膜后直接進入納濾膜進行脫鹽濃縮后進行噴粉干燥，即為成品。分子量大于2KD的部分返回到生物酶解罐繼續酶解。