[發明專利]哺乳動物胚胎和卵母細胞玻璃化冷凍載體

有效

• 申請號: 201210172951.8
• 申請日: 2012-05-30
• 公開（公告）號: CN102669088B
• 公開（公告）日: 2013-08-14
• 發明（設計）人: 施巧婷;王二耀;辛曉玲;郎利敏;陳俊峰;張玉洋;魏成斌;水谷將也;島田浩明;徐照學
• 申請（專利權）人: 河南省農業科學院
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 鄭州大通專利商標代理有限公司 41111
• 代理人: 陳大通

技術領域

本發明涉及細胞玻璃化冷凍技術領域，特別涉及一種哺乳動物胚胎和卵母細胞玻璃化冷凍載體。

背景技術

哺乳動物卵母細胞和胚胎冷凍是人類和動物生殖生物學的重要組成部分。特別是玻璃化冷凍的發明，可以使冷凍不需要借助常規的冷凍儀器，將冷凍材料放入冷凍液后直接投入液氮，?大大簡化了程序。玻璃化冷凍技術是利用體積微小的冷凍載體，在極快的降溫（>2000℃/min）過程中，使高濃度的冷凍保護液變為黏度很強的類似玻璃樣的固態，避免細胞內冰晶的形成，達到冷凍保護的目的，從而顯著提高細胞、組織冷凍后的存活力和發育能力。

常用的玻璃化冷凍方法有：尼龍環玻璃化法（Cryoloop）、開放式拉管法（OPS,?Open?Pulled?Straw）、微細玻璃管法（GMP）、微滴法（Microdrops）、銅網法、Cryoloop、Cryotop等。

在玻璃化冷凍過程中冷凍載體的選擇非常重要，直接影響著冷凍效率。冷凍載體的功能在于承載標本的同時盡量減少負載的冷凍液，達到冷凍過程中使標本直接接觸液氮，快速降溫達到玻璃化狀態，同時解凍過程中又能迅速脫除冷凍液的目的。開放式拉管法由于重量輕冷凍時易漂浮于液氮表面，而且細管管壁較薄，在液氮中極易斷裂在成樣品丟失。微細玻璃管法在冷凍過程中易斷裂，易造成樣品丟失；GMP的直徑和體積很小，限制了一次冷凍的樣品數量，而且該法虹吸效果顯著，增加了操作難度。微滴法在貯存過程中無法進行標識，不利于樣品的長期貯存。銅網法、Cryoloop和Cryotop在冷凍解凍過程中都存在樣品丟失現象。

發明內容

針對目前現有技術中細胞冷凍存在的問題和缺陷，本發明提供一種哺乳動物胚胎和卵母細胞玻璃化冷凍載體。

技術方案：一種哺乳動物胚胎和卵母細胞玻璃化冷凍載體，包括冷凍細管和錐形吸頭，兩者匹配對扣安裝，其中所述冷凍細管的后端安裝有金屬配重體，該金屬配重體與冷凍細管的存放內腔之間設置有密封隔層。

所述冷凍細管的前端與錐形吸頭連接處設置有至少一條縱向的剪切口。

所述金屬配重體完全密封于冷凍細管的后端，或者，在金屬配重體接觸的冷凍細管側壁上設置有孔。

所述金屬配重體的前端設置有叉狀筋，所述叉狀筋穿過隔層后伸入存放內腔中，并貼合固定在冷凍細管的內側壁上。

所述金屬配重體外露于冷凍細管之外，金屬配重體僅有部分與冷凍細管套裝固定，金屬配重體的前端設置有叉狀筋，所述叉狀筋穿過隔層后伸入存放內腔中，并貼合固定在冷凍細管的內側壁上。

所述錐形吸頭的尖端切口處的口徑范圍為100μm～200μm。

有益效果：1.?本發明成本低，制作材料可以常用的耗材，操作簡單。2.?能夠精確控制冷凍液的量，而且一次可以冷凍多枚卵母細胞或者胚胎。3.采用金屬配重體，樣品不會漂于液氮表面，不會丟失樣品。4.采用金屬配重體具有較好的導熱性能，使冷凍速度快、效率高，減少了樣品的冷凍損傷。尤其是采用了延伸到存放內腔中的叉狀筋，不僅起到支撐冷凍管從而保護冷凍細胞的作用，而且與金屬配重體連接具有加快降溫的作用，降溫效果顯著。5.載體可重復利用，不會斷裂丟失樣品，節約成本。在細管上可以做標記，便于長期保存。

附圖說明

圖1是本發明玻璃化冷凍載體的冷凍細管剖面結構示意圖之一；

圖2是與圖1中冷凍細管配合安裝的錐形吸頭結構示意圖；

圖3是本發明玻璃化冷凍載體的冷凍細管剖面結構示意圖之二；

圖4是圖3的A部放大結構示意圖；

圖5是圖3的B-B剖面結構示意圖；

圖6是本發明玻璃化冷凍載體的冷凍細管剖面結構示意圖之三。

圖中標號1為冷凍細管，11為冷凍細管的存放內腔，2為金屬配重體，21為叉狀筋，3為隔層，4為封口，5為剪切口，6為孔，7為錐形吸頭，71為切口，72為安裝口。

具體實施方式????????????????????????????????????????????

實施例一：參見圖1和圖2，該哺乳動物胚胎和卵母細胞玻璃化冷凍載體包括冷凍細管1和錐形吸頭7，兩者匹配對扣安裝。