[發明專利]抗耐藥性病原菌感染多肽及其用途

有效

• 申請號: 201210171901.8
• 申請日: 2012-05-29
• 公開（公告）號: CN102702333A
• 公開（公告）日: 2012-10-03
• 發明（設計）人: 周長林;竇潔;王晶;郝青茹;王慧;周偉東
• 申請（專利權）人: 中國藥科大學
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;A61K38/16;A61P31/04
• 代理公司: 南京蘇科專利代理有限責任公司 32102
• 代理人: 孫立冰

技術領域

本發明涉及生物醫學技術領域，具體涉及一種抗菌多肽，本發明的抗菌多肽具有抗耐藥性病原菌感染，特別是抗超級耐藥細菌（超級細菌）的用途。

背景技術

抗生素的發現使人們進入了控制、治療細菌感染性疾病的時代。但是大量廣譜抗生素的使用同時加強了對致病菌的篩選作用，加速了致病菌的進化，使得細菌的耐藥率逐步增加，耐藥譜也不斷擴大，最終導致了超級耐藥細菌的出現。超級耐藥細菌（超級細菌）正在全球蔓延。據報道，超級細菌對目前臨床上使用的抗生素不敏感（替加環素和多粘菌素除外），其攜帶有超級耐藥的新德里金屬β-內酰胺酶-1（New?Delhi?metallo-β-lactamase-1，NDM-1）基因。近期研究表明，在院內感染病人中分離出含NDM-1基因（質粒編碼）的超級細菌，其耐藥性大多是細菌在接觸抗生素后獲得的，并可通過耐藥基因的轉移而傳播和擴散，也可通過耐藥基因的復制而傳給細菌下一代。因此，尋求新的抗耐藥性病原菌感染的藥物，特別是抗超級耐藥細菌（超級細菌）的藥物在臨床上具有重要意義。

由于抗微生物多肽具有廣譜的抗菌活性和廣泛的生物學功能，近年來有關抗微生物多肽的研究已經得到廣泛重視?？咕挠捎诳咕鷻C理不同于傳統抗生素，不容易產生耐藥細菌，因此在臨床上治療耐藥性病源菌感染的疾病具有獨特的優勢。Cathelicidin家族，是一類N端有一段Cathelin結構域而C端含有高度特異的成熟肽段的抗微生物多肽家族，具有廣譜抗菌活性。其不僅對革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌具有非常強的殺菌活性，而且對某些真菌以及病毒同樣具有作用。除了具有抗菌活性外，Cathelicidin家族多肽還具有其他重要的生物學功能，包括促進創傷修復，作為化學引誘劑召集炎癥細胞到達炎癥部位，誘導血管生成，結合內毒素，以及誘導細胞溶解等。上述生物學效應增強了其對宿主的防御機制，促使機體能夠從病原體感染中恢復過來。

抗菌肽大部分是以兩親螺旋的形式和胞膜發生作用，肽鏈長度、螺旋性、疏水性、疏水距、電荷及親水面和疏水面的夾角等結構參數對膜活性（結合和穿透能力）和選擇性有影響，大多數抗菌肽帶有正電荷。在多肽與負電性的革蘭陰性和陽性細菌細胞膜相互作用中，正電荷所起的作用是眾所周知的，正電荷增加，抗菌活性增加，但不是簡單的正相關關系。多肽的兩親性則是指沿螺旋軸平行的兩個側面，一側親水殘基集中，顯親水性，另一側疏水殘基較多，顯疏水性，兩親性使得螺旋的側面上形成了疏水矩。

發明內容

本發明設計并公開了一種抗菌多肽，具有抗耐藥性病原菌感染功效，特別是具有抗超級耐藥細菌的功效。

本發明依據Cathelicidin家族的抗菌多肽，將其部分活性氨基酸位點進行突變，采用固相化學合成法獲得對耐藥性病原菌具有高抑制活性的抗菌多肽，并以本研究構建的超級耐藥的重組E.coli(NDM-1)為對象，研究其對超級耐藥細菌的抗菌活性。

本發明的抗菌多肽，其氨基酸序列其氨基酸序列如SEQ?ID：NO：1所示或如SEQ?ID：NO：2所示。

本發明氨基酸序列之一如SEQ?ID：NO：1所示的多肽。簡稱Cbf-K₁₆，全序列為：賴氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸-精氨酸-賴氨酸-亮氨酸-賴氨酸-賴氨酸-絲氨酸-纈氨酸-賴氨酸-賴氨酸-精氨酸-丙氨酸-賴氨酸-賴氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸-賴氨酸-賴氨酸-脯氨酸-精氨酸-纈氨酸-異亮氨酸-甘氨酸-纈氨酸-絲氨酸-異亮氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸。

本發明另一個氨基酸序列如SEQ?ID：NO：2所示的多肽。簡稱Cbf-A₇A₁₃，全序列為：賴氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸-精氨酸-賴氨酸-亮氨酸-丙氨酸-賴氨酸-絲氨酸-纈氨酸-賴氨酸-賴氨酸-丙氨酸-丙氨酸-賴氨酸-谷氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸-賴氨酸-賴氨酸-脯氨酸-精氨酸-纈氨酸-異亮氨酸-甘氨酸-纈氨酸-絲氨酸-異亮氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸。

采用固相化學合成法即可得到本發明的抗菌多肽。

本發明還公開了一種構建超級耐藥細菌（超級細菌）-重組E.coli(NDM-1)表達系統的方法。