[發明專利]一種瓊脂擴散法檢測鴨黃病毒抗體的方法

無效

• 申請號: 201210171724.3
• 申請日: 2012-05-29
• 公開（公告）號: CN102914647A
• 公開（公告）日: 2013-02-06
• 發明（設計）人: 王桂軍;王漢清;張洪輝;劉雪蘭;李槿年;李郁;魏建忠;楊德康;倪欣濤;李寧
• 申請（專利權）人: 安徽農業大學
• 主分類號: G01N33/559
• 分類號: G01N33/559
• 代理公司: 安徽省合肥新安專利代理有限責任公司 34101
• 代理人: 何梅生;王偉

1.一種瓊脂擴散法檢測鴨黃病毒抗體的方法，其特征在于：該方法包括如下步驟：

（1）無菌采集感染鴨黃病毒的病鴨卵巢病變組織，將其研磨勻漿后反復凍融三次，12000r/min離心10min；無菌條件下取其上清液，將上清液經0.22um微孔濾膜過濾除菌后接種10日齡SPF（即無特定病原體）雞胚，0.2mL/枚，于38℃孵化箱孵育，棄去24小時內接種死亡的雞胚，收獲48小時至120小時內死亡雞胚尿囊液，連續傳至5代，收獲病毒尿囊液；將第5代黃病毒尿囊液經3‰甲醛混合搖勻，于37℃搖床內滅活36小時，得到鴨黃病毒瓊擴抗原；

（2）用pH值為7.2，濃度為1/15M的PBS緩沖液配制1%瓊脂糖凝膠，制備瓊擴平板，瓊脂糖凝膠厚度在4.8mm～5.2mm之間，用七孔梅花打孔器打孔；將制備的瓊擴抗原加入中間孔，其加入量為每孔25微升；將待檢測的瓊擴抗體按2倍稀釋后的濃度依次加入周圍六孔，即加入六孔的瓊擴抗體的濃度分別是原瓊擴抗體濃度的2^-1,2^-2,2^-3,2^-4,2^-5，2^-6；將瓊擴平板于37℃濕盒中反應15小時后觀察，讀取瓊擴效價。