[發(fā)明專利]絲膠蛋白代替天然成分的植物培養(yǎng)基

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210171354.3
• 申請(qǐng)日: 2012-05-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102823489A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-12-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 董揚(yáng);王文;張葉勝
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 董揚(yáng);王文
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 朱水平;沈利

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物培養(yǎng)基領(lǐng)域，特別涉及一種絲膠蛋白替代植物培養(yǎng)中的天然成分的培養(yǎng)基。

背景技術(shù)

培養(yǎng)基是人工配制的，滿足不同材料生長(zhǎng)，繁殖或積累代謝產(chǎn)物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。在離體培養(yǎng)條件下，不同種類植物對(duì)營(yíng)養(yǎng)的要求不同，甚至同一種植物不同部位的組織以及不同培養(yǎng)階段對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求也不相同。篩選合適的培養(yǎng)基是植物組織培養(yǎng)極其重要的內(nèi)容，是決定成敗的關(guān)鍵因素之一。

大多數(shù)植物培養(yǎng)基的主要成分是無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)（大量營(yíng)養(yǎng)元素和微量營(yíng)養(yǎng)元素）、碳源、有機(jī)添加物、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑和凝膠劑。一些植物組織可以生長(zhǎng)在簡(jiǎn)單的培養(yǎng)基上，這些培養(yǎng)基只含無(wú)機(jī)鹽和可利用的碳源（蔗糖），但大多數(shù)植物組織必須在培養(yǎng)基中添加維生素、氨基酸和生長(zhǎng)物質(zhì)，而且經(jīng)常還將一些復(fù)合的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)加入到培養(yǎng)基中，這種由“化學(xué)定義”的化合物組成的培養(yǎng)基稱為“合成”培養(yǎng)基。

合成植物培養(yǎng)基大致由7種成分組成：（1）糖類，（2）多種無(wú)機(jī)鹽類，（3）微量元素，（4）氨基酸、酰胺、嘌呤，（5）維生素，（6）生長(zhǎng)素，（7）養(yǎng)基還可添加天然的汁液，如椰子汁、酵母提取液、水解酪蛋白、麥芽浸出液等，由于天然有機(jī)物質(zhì)成分復(fù)雜，常因品種、產(chǎn)地和成熟等因素而變化，實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性比較差。另外，有些天然有機(jī)物質(zhì)還會(huì)因高壓滅菌而變性，從而失去效果，這時(shí)應(yīng)該采取過(guò)濾的方法進(jìn)行滅菌。培養(yǎng)基中如加入0.5～1％的瓊脂即為靜止培養(yǎng)的固體培養(yǎng)基，否則為懸浮培養(yǎng)的液體培養(yǎng)基。不同植物材料常需要改變配方，如維持生長(zhǎng)和誘導(dǎo)細(xì)胞分裂和分化的培養(yǎng)基配方就不同，因此配方的種類很多，目前以MS（Murashige?and?Skoog）培養(yǎng)基配方為最常用的一種基本培養(yǎng)基，它利于一般植物組織和細(xì)胞的快速生長(zhǎng)。

絲膠（sericin）是構(gòu)成蠶絲纖維外層組織的蛋白質(zhì)。絲膠對(duì)包裹在其內(nèi)部的絲素起著保護(hù)和粘接的作用。絲膠具有水溶性，易溶于熱水、酸、堿溶液中。組成絲膠的多數(shù)氨基酸含有羥基、羧基、氨基等極性較強(qiáng)的側(cè)基，總量占整體的三分之二，其中絲氨酸和天冬氨酸就分別占33％和17％。

鱗翅目蠶蛾科的家蠶Bombyx?mori成繭的絲和大蠶蛾科Saturniidae某些屬的野生大蠶蛾成的繭可以用來(lái)制備絲膠。除家蠶外，本發(fā)明涉及的可以制備絲膠的資源主要有天蠶（Antheraea?yamamai；giant?silkworm；Japanese?oak?silkmoth）；中國(guó)柞蠶（Antheraea?pernyi；tussah；Chinese?oak?silkmoth）；琥珀蠶（Antheraea?assama；muga?silkworm）；印度柞蠶（Antheraea?proylei）；山蠶（Antheraea?roylei）；塔色蠶（Antheraea?mylitta；Tasar?silkworm）；蓖麻蠶（Samia?Cynthia；eri-silkworm），柳蠶（Ctias?selene），烏桕大蠶蛾（Attacus?atlas），黃目天蠶屬（Caligula），透目天蠶屬（Rhodinia）等一些吐絲能力較強(qiáng)的絹絲昆蟲(chóng)。

發(fā)明內(nèi)容

因此，本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題就是針對(duì)植物培養(yǎng)基中天然有機(jī)物質(zhì)成分復(fù)雜，常因品種、產(chǎn)地和成熟等因素而變化，實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性比較差，另外，有些天然有機(jī)物質(zhì)還會(huì)因高壓滅菌而變性，難于滅菌的問(wèn)題，從而提供一種可以代替天然添加物的植物培養(yǎng)添加劑及含有該添加劑的植物培養(yǎng)基。

經(jīng)過(guò)廣泛的研究和反復(fù)的試驗(yàn)，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)絲膠蛋白用于植物培養(yǎng)基中能夠促進(jìn)愈傷組織和體外胚生長(zhǎng)，提高愈傷組織質(zhì)量，代替植物培養(yǎng)中的天然添加物，從而完成了本發(fā)明。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：一種植物培養(yǎng)基，包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基和營(yíng)養(yǎng)添加劑，其特征在于，所述的營(yíng)養(yǎng)添加劑是0.1-10g/L絲膠蛋白。

本發(fā)明中，所述的基礎(chǔ)培養(yǎng)基是各種常規(guī)的用于植物組織細(xì)胞培養(yǎng)的合成培養(yǎng)基，這些培養(yǎng)基加入植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑、糖、天然營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)后即可用于植物組織細(xì)胞培養(yǎng)。這些培養(yǎng)基都是本發(fā)明可以采用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基。較佳的為MS、N6、B5或者NB培養(yǎng)基。

本發(fā)明所述的絲膠蛋白包括家蠶絲膠蛋白、柞蠶絲膠蛋白、蓖麻蠶絲膠蛋白、天蠶絲膠蛋白、琥珀蠶絲膠蛋白、柳蠶絲膠蛋白和烏桕大蠶蛾絲膠蛋白中的一種或多種。絲膠蛋白在培養(yǎng)基中的濃度是0.1-10g/L，優(yōu)選0.25-5g/L。

本發(fā)明所述的植物培養(yǎng)基較佳的還包括凝固劑。所述的凝固劑為本領(lǐng)域常規(guī)，如瓊脂，其濃度為本領(lǐng)域常規(guī)。