[發明專利]一種鄰苯二甲酸二丁酯的微生物制備方法

有效

• 申請號: 201210171351.X
• 申請日: 2012-05-29
• 公開（公告）號: CN102703534A
• 公開（公告）日: 2012-10-03
• 發明（設計）人: 高英;熊琦;張艷峰;薛皎亮;謝映平
• 申請（專利權）人: 山西大學
• 主分類號: C12P7/62
• 分類號: C12P7/62;C12N1/14;C07C69/80;C07C67/56;C12R1/645
• 代理公司: 山西五維專利事務所(有限公司) 14105
• 代理人: 楊耀田

1.一種鄰苯二甲酸二丁酯的微生物制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)一級斜面菌種培養：將微生物菌種接入斜面培養基，在溫度為20℃-28℃，相對濕度為60%-85%下培養，待菌絲長滿斜面并產生孢子時備用；

(2)二級菌種培養：在100-200ml的三角瓶中加入30-50%三角瓶體積的液體培養基，將斜面菌種在無菌條件下接入液體培養基中，在20℃-28℃，150-200r/min下培養7-10天；

(3)菌種發酵液培養：將二級菌種接入液體發酵罐中，發酵罐裝液量為罐容積的65-75%，接種量為裝液量的5-10%，通氣量按體積比1:1，壓力0.1MP，在20-28℃培養10-15天；

(4)將培養好的菌種發酵液在4000-5000r/min下離心10-15min，除去菌絲體，將上清液在45-60℃下減壓濃縮至原體積的1/4-1/5，室溫下按體積比加入2-4倍乙醇，靜置24h-36h，4000-5000r/min下離心10-15min，去除沉淀，再將上清在45-60℃下減壓濃縮至原體積的1/4-1/5，得濃縮脫醇液；

(5)將濃縮脫醇液加入等體積乙酸乙酯，超聲萃取3-5次，合并有機相并濃縮干燥，用少量的乙酸乙酯重新溶解，然后干燥得乙酸乙酯粗提物；

(6)高速逆流色譜分離純化：分離系統為正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水配制的兩相溶劑，體積比：正己烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶水=4∶5∶4∶5，在轉速為820r/min，流動相流速為1ml/min的條件下進行分離，450min后停止分離，將螺旋柱中的固定相用氮氣吹出并收集，將收集液減壓濃縮至無色油狀液體，即為鄰苯二甲酸二丁酯。

2.如權利要求1所述的一種鄰苯二甲酸二丁酯的微生物制備方法，其特征在于，所述的斜面培養基：馬鈴薯200g、瓊脂20g、葡萄糖20g、蒸餾水1000ml。

3.一種鄰苯二甲酸二丁酯的微生物制備方法，其特征在于，所述的液體培養基：硝酸鈉3g、磷酸氫二鉀1g、硫酸鎂(MgSO₄·7H₂O)0.5g、氯化鉀0.5g、硫酸亞鐵0.01g、蔗糖30g、蒸餾水1000mL。

4.一種鄰苯二甲酸二丁酯的微生物制備方法，其特征在于，所述的微生物菌種為Verticillium?lecani保藏號：CGMCC?NO.3.4505，Verticillium?lecani保藏號：CGMCC?NO.3.4504，或Beauveria?tenella保藏號：CGMCC?NO.2382。